砷暴露小鼠肝组织核酸损伤免疫组织化学观察_药学论文.docVIP

砷暴露小鼠肝组织核酸损伤免疫组织化学观察_药学论文 砷暴露小鼠肝组织核酸损伤免疫组织化学观察_药学论文 作者：李秋娟，杨光，叶建新，孙鲜策，陈敏，刘晓芳，朴丰源 【关键词】 砷；肝；8 　　摘要：目的 为进一步研究砷对肝脏的毒性作用机制提供实验依据。方法 昆明种小鼠40只，随机分为4组：1,2,4mg/L三氧化二砷染毒组和生理盐水组，连续染毒60d，取小鼠肝组织固定，用免疫组化方法观察肝脏组织细胞的8Nitroguanine表达。结果 染砷组小鼠肝细胞出现抗8Nitroguanine免疫染色阳性反应，并随着砷暴露剂量的增加 而呈现明显的剂量-反应关系。结论 慢性低剂量砷暴露可诱发小鼠肝细胞8Nitroguanine的高表达，提示8硝基鸟嘌呤核苷(8Nitroguanine)可以作为砷对肝细胞毒性作用的早期敏感生物标志物。 　　关键词：砷；肝；8Nitroguanine；免疫组化；核酸损伤 　　Observation on nucleic acid damage of liver in mice exposed to arsenic in low dose by immunohistochemistry 　　Department of Hygiene,Dalian Medical University(Dalian 116027,China)Abstract： Objective To provide evidence for exploring the mechanism of arsenicinduced hepatoxicity.Methods Forty mice were diveded into 4 groups, e.g.,one controls and 3 experimental groups(1 mg/L As2O3,2 mg/L As2O3 and 4 mg/L AS2O3).As2O3 was administered for 60 days.Immunohistochemistry method was used to investigate 8Nitroguanine expression in liver tissue of mice.Results Expression of 8Nitroguanine was observed in the liver tissue of mice exposed to arsenic and there was relationship of doseresponse in expression of 8Nitroguanine with the increase arsenic dose.Conclusion Arsenic induced high expression of 8Nitroguanine in liver tissue of mice.8Nitroguanine might be an earlier sensitive bio-marker for arsenic toxicity to liver. 　　Key words：arsenic；liver；8Nitroguanine；immunohistochemistry；nucleic acid 　　近年来，动物实验和人群流行病学调查均表明，砷可引起不同程度的肝损伤、肝纤维化、肝硬化及肝癌〔1-3〕。研究表明，砷可影响体内氧化还原平衡，增高肝细胞脂质过氧化水平，降低谷胱甘肽(GSH)浓度和抗氧化酶活性，使肝组织受到自由基损害〔4，5〕。但是，其机制目前尚不十分清楚。本研究以小鼠为研究对象，以8Nitroguanine作为生物标志物，通过免疫组化方法，观察砷对肝组织细胞核酸的损伤作用，为探讨砷的肝脏组织毒性作用机制提供依据。 　　1 材料与方法 　　11 材料 抗8-硝基鸟嘌呤单克隆抗体(日本岛津公司)；UltraSensitiveTM SP超敏试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司）；其他试剂均为分析纯。 　　12 方法 　　121 动物处理 成熟健康昆明种小鼠40只，雌雄各半(大连医科大学实验动物中心)。按体重随机分为4组：1,2,4mg/L的三氧化二砷(As2O3)染毒组和生理盐水对照组。小鼠通过自然饮用含As2O3自来水方式染毒，每天测定水消耗量。连续染毒60d后，断头处死并立即取肝组织固定。 　　122 肝组织形态学观察(图1) 肝组织经福尔马林固定后，常规石蜡包埋，5μm连续切片，在65℃温箱中烤片60min；苏木素伊红(HE)染色，光镜下进行组织形态学观察。 　　123 肝组织免疫组织化学观察 按照免疫组化染色法(SP)〔5〕，在肝