第二章 发酵过程优原理 1.doc

第二章 发酵过程优化原理 1 第一节 发酵过程优化的微生物反应原理 1 一、概述 1 二、微生物生长反应 1 第二节 发酵过程数量化方法 11 一、数量化方法的基础 11 二、发酵过程的速度 13 三、化学计量学和热力学 15 第三节 微生物反应动力学 21 一、微生物生长的非结构动力学模型 22 二、微生物产物形成动力学模型 27 三、多底物动力学 28 第四节 微生物反应优化的一般原理 30 一、发酵过程优化的一般步骤 30 二、分批微生物反应过程的优化 30 第二章 发酵过程优化原理 第一节 发酵过程优化的微生物反应原理 一、概述 微生物是发酵工业的灵魂，对微生物控制的发酵过程进行优化，首先要了解微生物的生长反应特性。微生物细胞生长是细胞个体内许多化学反应的综合结果。这些反应包括合成提供其它反应需要的吉布斯自由能；利用底物合成结构单元，再聚合成大分子物质，供合成细胞所需等。正常情况下，微生物细胞为了确保有序和高效生长，必须将这些反应有机地结合在一起，经济地分配胞内各代谢途径的通量。 大肠杆菌是发酵研究中用得最多的微生物。在大肠杆菌生长过程中前人已观察到下列现象∶ (1)在大肠杆菌快速生长期间，生物合成的中间体很少渗漏到胞外培养基中，结构单元(氨基酸、核酸等)的合成速率和聚合形成大分子的速率一致； (2)大肠杆菌胞内的大分子物质随比生长速率而变化。细胞以高比生长速率生长时对蛋白质的需求很高，因此相对于低的比生长速率来说，蛋白质合成系统(PSS)在细胞中占有很大比例。在低比生长速率下，PSS的利用率很低，其合成和维护对微生物来说是无用的代谢负担； (3)一旦生长培养基中的结构单元足够，细胞就不再合成这些物质； (4)特定的代谢途径代谢特定的底物，只有底物存在时，细胞才合成相应的酶。例如，只有当乳糖存在时，大肠杆菌才合成(-半乳糖苷酶将乳糖降解成半乳糖和葡萄糖； (5)若两个不同的底物同时存在于培养基中，细胞先合成能在一种底物上以较高比生长速率生长的酶系，当这种底物消耗完毕，再合成利用另一底物的酶。如大肠杆菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基中生长，首先代谢葡萄糖，此生长阶段不产生(-半乳糖苷酶，不能代谢乳糖。当葡萄糖浓度变得很低时，系统合成(-半乳糖苷酶并利用乳糖继续生长。 以上观测结果对其它微生物也具有一定的适用性。由于微生物胞内代谢途径紧密结合，因此，对全部过程进行建模(如对特定微生物的生长和产物形成)，并不需要描述所有独立的反应。如对微生物生长建模时，可以将所有的代谢途径混合起来用几个单一反应来表示，有时甚至用一个反应式就可描述全部的生长过程。本节主要讨论微生物生长反应的基本原理。 二、微生物生长反应 细胞生长过程可分为三个步骤：(1)底物传递进入细胞；(2)通过胞内反应，将底物转变为细胞质和代谢产物；(3)代谢产物排泄进入非生物相，即胞外培养基。 培养基中存在的底物都是化学物质，可以被细胞摄入并代谢掉，或转化为其它细胞生长所需要的物质。有些代谢产物还可以作为二次底物被细胞利用，所以很难说这些物质到底是底物还是产物。如酿酒酵母的二次生长现象，当酵母以葡萄糖为底物生长的同时会产生乙醇，葡萄糖耗尽后，细胞能继续以乙醇为底物生长。根据在大肠杆菌生长过程中观察到的五种情况类推，当培养基中存在葡萄糖时，细胞不产生代谢乙醇的酶。因此，在利用葡萄糖生长和利用乙醇生长之间有一个滞后的阶段。在本书中，认为底物是最初存在于培养基中的底物。如上所述，葡萄糖是底物，而乙醇则是代谢产物。代谢产物是那些形成于胞内，能够穿过细胞膜的物质，它们可以被排泄进入非生物相。因此，代谢产物既可以是底物经过多步反应形成的小分子物质，也可以是细胞产生的大分子物质，如胞外蛋白酶。细胞质成分则是由底物形成的、不能穿过细胞膜的物质。众所周知的细胞质成分有蛋白质、RNA和DNA，一些小分子如ATP、NADH以及NADPH也可以归为细胞质成分。 基于以上的讨论，本书对底物、代谢产物和细胞质成分的定义为：底物是一种存在于初始非生物相或者摄入物中起作用的可交换的化合物；代谢产物是一种作为代谢物产生于某代谢途径进入非生物相的化合物；细胞质成分是一种细胞利用底物产生的不可交换的化合物。以下分别讨论运输过程(底物的摄入和产物的分泌)和胞内反应过程。 (一)运输过程 大多数细胞的细胞质外有两种结构：细胞壁和细胞膜。这些结构是细胞的屏障，其化学成分决定了物质能否在非生物相和细胞质之间运输。细胞壁是一种由交联肽聚糖构成的坚固结构，其主要功能是为了防止因胞内高的渗透压而引起细胞破裂。细胞膜主要由磷脂组成，在细胞生长过程中，具有变化的流动结构。大部分小分子很容易通过细胞壁，因此运输过程主要决定于细胞膜。大分子物质只有在细胞具有