12级实验一还原糖、脂肪蛋白质鉴定.ppt

（2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选富含脂肪且体积比较大的种子，才有利于徒手切片，如花生种子。 * 一、验证鉴定类实验 1．实验目的 针对已知的生物学事实进行验证，巩固和加强有关知识内容，培养实验操作能力。 2．常用方法和技术 (1)研磨、过滤：如生物组织样液制备。 (2)颜色反应：如生物组织中有机物的鉴定。 (3)纸层析法：如叶绿体中色素的分离。 (4)同位素示踪法：如噬菌体侵染细菌实验。 3．特定化学物质的检测方法 常用指示剂或指示物 作用 现象 碘液 检测淀粉 变蓝 斐林试剂 检测还原糖 砖红色沉淀 双缩脲试剂 检测蛋白质 紫色 苏丹Ⅲ/Ⅳ染液 检测脂肪 橘黄色/红色 Ca(OH)2溶液 检测CO2 石灰水变浑浊 二苯胺 鉴定DNA 蓝色 余烬木条 检测O2 木条复燃 二、还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 基础梳理 1、实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。 还原糖+斐林试剂 砖红色沉淀 脂肪+ 苏丹Ⅲ染液 橘黄色 苏丹Ⅳ染液 红色 蛋白质+双缩脲试剂→紫色 沸水浴 2．实验流程 (1)还原糖的鉴定 甲液和乙液等量混合均匀后使用 （2）脂肪的鉴定 取材：花生种子浸泡3～4h，去皮，将子叶削成薄片 ↓ 制片 （1）取最理想的薄片 （2）在薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染色2~3 min（3）去浮色（体积分数为50%的酒精） （4）制成临时装片 ↓ 观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒 然后用高倍镜观察，可观察到橘黄色颗粒 ↓ 结论：花生种子中含有脂肪 （3）蛋白质的鉴定 组织样液中有蛋白质。 升华提高 一、实验材料的选择 （1）还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含还原糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，易于观察。可选用苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖是一种非还原糖;马铃薯因含淀粉较多也不能做实验材料；不能选西瓜、血液（含葡萄糖）、含还原糖的绿色叶片等做实验材料,以避免颜色的干扰。 思考：能不能选用甜菜、甘蔗、马铃薯、西瓜、血液、 韭菜？ 课堂练习1：（2007年江苏生物，19）若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的描述中，正确的是（ ） A.鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀 B.只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂B C.鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料 D.蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长 A （3）蛋白质的鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋的蛋清（一定要稀释）。 思考：斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为什么？ 二、斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析 颜色 呈色反应条件 使用方法 反应原理 浓度 相同点 不同点 双缩脲试剂 斐林试剂 比较项目 乙液CuSO4浓度0.05g/mL B液CuSO4浓度为0.01g/mL 还原糖中的醛基被 Cu（OH）2氧化， Cu（OH）2被还原为Cu2O 具有两个上肽键的化 合物在碱性条件下与 Cu2+反应生成络合物 甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用 使用时先加A液摇匀后，再加B液 需加热煮沸 不需加热即可反应 砖红色 紫色 都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是0.1 g/mL ③、鉴定蛋白质时，向匀浆中加入2mL双缩脲试剂A时摇匀，再加入3～4滴双缩脲试剂B摇匀。其中双缩脲试剂B的量不能过量，因为过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖生成的紫色。 课堂练习2： A 课堂练习3、下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是( ) A.用于鉴定还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定 B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的圆形小颗粒 C.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入到含样品的试管中，且必须现配现用 D.在鉴定脂肪的实验中，苏丹Ⅳ染液染色的时间比苏丹Ⅲ染液染色的时间长 B * * *