外周血PBMC的分离.docVIP

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2017-08-22 发布于重庆
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外周血PBMC的分离.doc

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外周血PBMC的分离.doc

PBMC简介英文全称：peripheral blood mononuclear cell 外周血单个核细胞，指外周血中具有单个核的细胞。包含淋巴细胞、单核细胞（monocyte）、树突状细胞和其它少量细胞（造血干细胞等）。 PBMC分离方法外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 1.采血，稀释（外周血：稀释液PBS=1：1） 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：1） 3.20℃，1500r/min，离心30min （3） 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中 5.加足量稀释液PBS充分洗涤，1800 r/min离心10min ，弃上清。（4） 6.加足量稀释液PBS充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。（2） 7.加冻存液（约1.5ml），分装至3小瓶，每瓶约0.5ml，-80保存选择转速 3、4、2 注意事项 1.093 外周血红细胞粒细胞单个核细胞血小板淋巴细胞单核细胞 1.030~1.035 1.075~1.090 Ficoll：1.077±0.001 (PBMC) 1.092 1500rpm, 20℃ , 30min PBMC 红细胞粒细胞 Ficoll 稀释外周血 Ficoll 稀释的血浆、血小板每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞 Ficoll应适量，外周血应充分稀释温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染