萝卜游离小孢子培养及胚再生植株的研究.pdfVIP

萝l＼游离小孢子培养及胚再生植株的研究 王春丽一，张雪清，张小康，熊秋芳 (武汉市蔬菜科学研究所，武汉430065) 摘要：对22份萝卜材料进行游离小孢子培养，12份获得了胚状体，3份获得 再生植株，出胚基因型范围达54．5％，出胚材料中90％以上为杂种一代。40C低温预 处理0．3d，4个处理间小孢子出胚率无明显差异；不同萝卜品种适宜的热激温度及时 间有所不同；培养基中加入1．2滴0．5％的活性炭和一定浓度的6．BA可以显著促进小 孢子诱导产生胚；发育健康的子叶型胚状体成苗率为100％：胚状体萌发、分化早期 的适宜培养摹为B5+2％蔗糖+1．2％琼脂，后期可逐渐将琼脂浓度降低。FCM测定小 孢子植株自然加倍率为30％，单倍体占少数，四倍体与混倍体均为30％。 关键词：萝卜；小孢子培养；胚状体；植株再生：倍性测定 游离小孢子培养技术可以快速纯化自交系，结合传统育种方法可加快品种的更新换代。萝 L．)是十字花科作物中最不容易进行游离小孢子培养的材料之一(Takahata 卜(Raphanussativus 丽，2004；陈文辉等，2006；周志国等，2007；赵艳玲，2008)。前人的研究均存在出胚率低、 再生株获得数量有限等问题，且研究选用试材多是常规品种，在育种实践中应用价值较小。本 研究结合实际育种工作，以多个萝卜杂种一代和少量常规品种为材料，探讨供体植株在自然生 长条件下若干因素对小孢子胚诱导及胚再生植株的影响，旨在完善萝卜游离小孢子培养技术， 加快其在育种实践中的应用步伐。 1材料与方法 1．1试验材料 本研究共选择22份不同类型的萝卜品种(表1)为试材。15份杂交一代品种于2008年 9月露地直播于武汉市蔬菜科学研究所试验基地，12月初选取部分生长良好的萝卜直根栽植越 冬，其他7份常规品种于2009年1月地膜覆盖播种，3月份分批采样进行小孢子培养。 1．2试验方法 1．2．1采样、预处理与小孢子培养 待植株现蕾后，于晴天上午采集健壮植株花蕾，测量并记录当天当时的外界温度，取样后 置于40C冰箱预处理O．3d。培养时取2．5．3．5mm长花蕾，B5培养基悬浮，NLN为摹本培养基。 花蕾密度调整为3蕾／lm，每皿加入1．2滴0．5％活性炭。封口后置于330C或350C恒温培养箱 进行热激处理1．2d，每个处理培养5皿，3次重复。然后于250c条件下静止黑暗培养，培养 35d后统计出胚率(按每皿出胚数计算)。 1．2．2胚培养与诱导成苗 游离小孢子于液体培养基上培养1周后，将肉眼可见的米粒状球形胚转移到250C恒温摇 床振荡培养，待肉眼可见的胚状体长至子叶期时，转至固体培养基B5上诱导成苗。 1．2．3植株倍性检测 在植株继代过程中取幼嫩叶片，采用流式细胞仪测定法对小孢子再生植株进行倍性鉴定。 流式细胞光度仪(Flow．Cytometer，FCM)由德国Partec公司生产。 ””基金项目：国家科技部科技支撑计划项目(2008BADBlB03) 作者简介：王春丽，女，硕士，从事十字花科蔬菜小抱r培养技术研究。 Tel：027 表1萝I、游离小孢子培养试材 Table1Materialsforisolated cultureinradish microspore 2结果与分析 2．1出胚范围及各品种出胚情况 表2所示，供试的22份材料中，12份诱导获得胚状体(图版1)，出胚基冈型范围达54．5％。 出胚材料中包括11份杂种一代品种，l份常规6占种，杂种一代占出胚晶种总数的90％以上。 11号品种出胚率最高，达7．2胚／IlK，且重复性好、球形胚和畸形胚少。14号品种出胚率次之， 达4．4胚／皿，但重复性差、球形胚和畸形胚多。其他品种出胚率较低，胚状体大都停留在球 形胚时期，不再继续发育。结果表明，萝I-杂种一代较常规品种易出胚，且不同品种出胚能力 和胚状体发育能力存在明显差异。 表2不同萝l、品种游离小孢子培养胚发育情况及成胚率 Table2The and indifferentradish microsporedevelopmentembryoidyield genotypes 2．2热激处理对小孢子培养