假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究.pdfVIP

应用与环境生物学报　2002 ,8 (5) :520～524 　 　 Chin J Appl Environ Biol = ISSN 1006687X 　 　 假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究 刘瑞田 　宋 　欣 　刘相梅 　康从宝 　曲音波 ( 山东大学微生物技术国家重点实验室　济南　250100) 摘　要 　应用多种化学修饰剂对假单孢菌 G62 产生的碱性木聚糖酶 A ( XynA) 进行了修饰. 结果表明 ,作用于色氨 ( ) ( ) ( ) 酸和谷氨酸 和/ 或天冬氨酸 的试剂 NBS NBromosuccinimide 和 WR K NEthyl5phenylisoxazolium3sulfonate 可分 别使酶活明显降低 ,而作用与丝氨酸、精氨酸、酪氨酸的试剂对酶活无明显影响. XynA 的化学修饰动力学分析表明 ,每 ( ) 个酶分子中有 1 个色氨酸残基和 1 个谷氨酸 或天冬氨酸 残基对酶的活性特别重要. NBS 的滴定结果表明 ,木聚糖的 加入可使 1 个色氨酸残基被保护 ,木聚糖对 NBS 的荧光猝灭有22 %的保护作用. 0. 2 %的燕麦木聚糖可完全阻止 NBS 对 XynA 的修饰作用;而即使 2 %的木聚糖也不能阻止WR K 的灭活作用. NBS 可使 XynA 的 Km 增大 4 倍 ,而 WR K 可 ( ) 使其 Vmax 降低三分之二. 这些结果表明 ,色氨酸和谷氨酸 或天冬氨酸 残基位于 XynA 的活性部位 ,且前者位于 XynA 的底物结合中心 ,后者位于酶的催化中心. 图 6 表 1 参 14 关键词 　碱性木聚糖酶 ;化学修饰 ;活性中心 CLC 　Q556 ; Q939. 112 ACTIVE SITES OF AL KAL INE XYLANASE MOL ECUL ES L IU Ruitian , SON G Xin , L IU Xiangmei , KAN G congbao QU Yinbo ( State Key L aboratory of Microbial Technology , S handong U niversity , Jinan 　250100 , China) Abstract 　Many modifiers were used to react with alkaline xylanase (XynA) . XynA could be inactivated by NBS ( ) ( ) Nb