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农药残留快速检测用大豆酯酶稳定性的研究1 周艳利，李建科 陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安 (710062) E-mail ：zhouyanli83@ 摘 要：本文研究了农药残留快速检测专用大豆酯酶酶制剂的保存稳定性，温度稳定性，酸 碱稳定性及保存条件。结果表明，该酶为一种耐热酶，等电点在4.0 左右，冷冻时酶活力损 失较快，并且牛血清白蛋白（BSA ）、蔗糖和甘油对酶有显著的保护作用。 关键词：农药残留，快速检测，大豆酯酶，稳定性 植物酯酶检测农残可以达到与动物胆碱酯酶相当的准确度和精密度[1，2] 。近年来备受研 究者关注。植物酯酶酶原丰富，取材方便，在农残快速检测中应用前景会更加广阔。因此， 研制具有高检测灵敏度和具有高保存性高稳定性的植物酯酶是开展这种技术的基础。本实验 室在在广泛筛选植物酶原的基础上,选定敏感性最好的大豆酯酶作为农药快速检测用生物识 别元件[3，4] [5] ，并已申请了专利 。 本文报道了本实验室自制大豆酯酶的保存条件稳定性，保存剂稳定性，温度和 pH 值稳 定性，目的在于寻找酶较优的保存条件和保存剂，确定使酶保持稳定的温度和 pH 条件，为 该酶的保存方法提供一定的依据。 1. 材料与方法 1.1 试剂 大豆: 秦豆8号(陕西省农业厅提供）。 大豆酯酶液：本实验室自制，已申请专利。 酶保护剂：蔗糖；牛血清白蛋白（BSA ）；甘氨酸（Gly ）；甘油；CaCl2 。以上试剂均为 分析纯。 底物：2.9794gα-乙酸萘酯用少量丙酮溶解并定容至100mL，摇匀后于4 ℃备用。 显色剂：取0.8g 固兰B和3.6gSDS，用少量水溶解并定容至100mL,过滤后滤液于4 ℃备用。 1.2 仪器设备 UNICO WFJ2000型分光光度计上海龙尼柯仪器有限公司；微型混合器：H-1型，上海康 禾光电仪器有限公司；U-3010紫外可见分光光度计：日本HITACHI公司； 1.3 方法 1.3.1 大豆酯酶活力的测定方法 总酯酶活力的测定和计算参照文献 4 的方法。 1.3.2 大豆酯酶的保存条件稳定性试验 取两份一定量的酶试剂原液，分别放置在 4 ℃和-20℃，隔一定时间测定酶活力，酶在 贮存后的残存活力与贮存前的活力之比即为酶活的保存率。 1.3.3 大豆酯酶保护剂稳定性试验 取一定量的酶试剂原液，以试验项目的不同分别加入不同的保护剂制得添加有保存剂的 1本课题得到国家科技攻关项目（2001BA804A28 ）、陕西省科技攻关项目（2004K01-G7 ）和西安市科技攻 关项目（GG05112 ）的资助。 -1- 试验样品若干，将试验样品置于 4 ℃冰箱中，按一定的时间间隔取出测定大豆酯酶的活力， 计算保存率。 1.3.4 大豆酯酶的温度稳定性试验 取一定量的酶试剂原液，分别于不同温度下放置 10min 后测定酶活力。 1.3.5 大豆酯酶的酸碱稳定性试验 取一定量的酶试剂原液，分别加入等体积不同 pH 值的缓冲液，放置 2h 后测定酶活力。 2. 结果与讨论 2.1 酶的保存条件 大豆酯酶在 4 ℃和-20℃的酶活保存率如图 1 所示，可见，大豆酯酶并非温度越低，保 存越稳定。-20℃保存稳定性差，30d 时酶完全失活，可能原因是反复冰冻和融化导致酶蛋 白质变性，从而使酶活大量损失。而大豆酯酶在 4 ℃条件下保存 30d 时的酶活保存率为 80%。 100 e 90 m y 80 z n