利用RAPD_PCR检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异.pdfVIP

菌 　物 　系 　统 　17 (2) :185～189 ,1998 Mycosystema 利用 RAPD - PCR 检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异 李增智 　黄 　勃 　樊美珍 　唐晓庆 ( 中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学开放实验室 北京 　100080) (安徽农业大学经济昆虫菌物研究所虫生菌研究室 合肥 　230036) 摘要 　采用 PCR - PA PD 技术研究了球孢白僵菌 2 株野生型多孢株及其各 1 株单孢分离株的 RA PD 扩增片段的多态性 , 比较了彼此间的相似率 。结果显示 ,相似率在 63 . 6 %～99 . 3 %之间 变化很大 ,表明各分离子间的基因组 DNA 已发生变化 。球孢白僵菌与另一种 白僵菌布氏白僵 菌之间的相似率在 64 . 9 %～80 . 9 %之间 ,与粘孢 白僵菌之间的相似率在 50 . 0 %～6 1. 9 %之 间。 关键词 　球孢白僵菌 ,布氏白僵菌 ,粘孢白僵菌 ,PCR ,RA PD ,多态性 中图分类号 　Q939 . 53 　　白僵菌属( B eauveria Vuill . ) 是虫生真菌中最重要的属和最常见的属之一 ,包括 5 个虫生种和 2 个 ( ) ( ) 腐生种 唐晓庆 ,樊美珍 ,1996 。其中的球孢白僵菌 B . bassiana Bals. Vuill . 是我国害虫生物防治中应 ( ) 用最广的昆虫病原真菌 。它在人工继代培养过程中常发生菌落局变现象 Saltation 导致菌种产孢量和 ( ) 杀 虫毒力下降 唐晓庆 ,唐燕平 ,1996 ;唐晓庆 ,黄勃 ,1996 。关于菌落局变分离子株的培养性状 、生物学 ( ) 特征及同工酶研究的结果皆暗示 ,该菌在菌落局变中遗传物质已发生变化 Williams et al . 1990 。然而 , 这种变化尚需分子生物学证据的证明。 ( ) ( ) ( 建立在聚合酶链式合成反应 PCR 技术基础上的 DNA 随机扩增多态性分析技术 RA PD 陆军 , 1993) 使我们可以较快地分析基因组 DNA 的差异 ,本研究将利用这一技术对球孢 白僵菌通过菌落局变 产生的不同类型的分离子株进行 DNA 多态性分析 ; 同时 ,还将对白僵菌属的 3 个常见种球孢 白僵菌 、布 氏白僵菌 B . brong niartii ( Sacc . ) Petch 和粘孢白僵菌 B . velat a Samson Evans 的基因组 DNA 指纹图 谱进行比较 。 1 　材料与方法 1. 1 　菌株及其培养 　　供试菌株的来源见表 1 。用 0 . 02 %吐温 - 80 将各菌株分生孢子配成 107 孢子/ ml 的菌悬液 ,涂布于 ( ) 铺有玻璃纸的 SDA Y 培养基 4 %葡萄糖 、1 %酵母粉 、1 %蛋白胨 、2 %琼脂 平板上 ,26 ℃培养 48 小时 。 1. 2 　D NA 提取 　　按朱衡等( 1994) 采用的程序 ,刮取干菌丝 ,利用氯化苄提取 D NA