利用SYBRGreen实时定量PCR法检测转基因植物外源基因的拷贝数.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2011，39(21)：12655—12657 责任编辑 乔利利 责任校对 李岩 利用 SYBRGreen实时定量 PCR法检测转基因植物外源基因的拷贝数 裘劫人，许颖，喻富根 (南京大学生命科学学院，江苏南京210093) 摘要 [目的]探讨SYBRGreen实时定量PCR技术应用于检测转基因植物外源基因拷贝数的可行性。[方法]使用SYBRGreen实时定 量PCR技术，以转CYCD3；1的拟南芥为材料，通过 CYCD3；1基因与单拷贝内参基因以及转基因株系中的CYCD3；1基因与野生型植株 的比较来确定外源基因的拷贝数。[结果]该法计算所得外源基因拷贝数与传统高准确性的Southemblot法结果相符。[结论]使用该 法检测外源基因拷贝数简单 易行，可操作性强。 关键词 转基因拟南芥；SYBRGreen实时定量PCR；基因拷 贝数 中图分类号 S188 ．1 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2011)21—12655—03 EstimatingtheCopyNumberofTransgenesinTransformedArabidopsisbySYBRGreenReal-timeQuantitativePCR QiUJie-renetal (CollegeofLifeSciences，NanjingUniversity，Nanjing，Jiangsu210093) Abstract O『bjectivelToexplorethefeasibilityofusingSYBRGreenreal—timequantitativePCRtechniquetoestimatethetransgenecopy numberofatransgenicplant． M『ethod]UsingSYBRGreenreal—timequantitativePCRtechnique，wehavedeterminedthecopynumbersof theexogenousCYCD3；lintransgenicplantsbycomparingallendogenoussinglecopyreferencegenewithCYCD3；1copynumberintransgenic plants，meanwhilecomparingG D3；1copynumbersbetweenwildplantandtransgenicplants．[Resuh]TheexogenousCYCD3；1copynun— berscalculatedbythismethodiSidentica1withresultsoftraditionalSoutl1emblotanalysiswhichiShighlyaccurate．1ConclusionlThismethod issimple，effectiveandsafeforestimating~ansgenecopynumbers． Keywords TransgenicArabidops~；SYBR greenrea1timequantitativePCR；Genecopynumber 自1986年人类首次获得转基因植物以来 ，植物转基因 术鉴定转基因水稻中插入基因的拷贝数 。使用实时定量 技术的研究和应用蓬勃发展。目前，转基因技术不仅应用于 PCR的优点是方便 、快捷 、灵敏性强，少量植物材料即可满足 遗传育种，而且也成为植物生理生化研究的重要手段。利用 需要，且安全、无放射性。但由于需要合成和标记发光基团， 由土壤农杆菌介导的植物遗传转化方法获得的转基因植物， 因此Taqman探针的价格较高 。。为此，笔者介绍了一种使 首先面临的就是外源基因拷贝数的确定。这是 由于在这一 用更加经济的SYBRGreen实时定量 PCR检测转基因拟南 植物遗传转化方法中使用的由rri质粒修改而成的转化载体 芥中外源基因拷贝数的方法，旨在为鉴定转基因拷贝数的研 中，携带外源基因的T—DNA随机插入植物基因组内，插入的 究提供理论依据。 拷贝数和位点都不固定。而外源基因的拷贝数显著影响插 1 材料与方法 入基因的表达量和遗传稳定性。据统