利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用不相容质粒共转化大肠杆菌对 !# 重组酶 体内重组活性的可视检测 ， # $ # # $ # 庞永奇 贾洪革 方荣祥 郭蔼光 陈晓英 # （中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室 北京 #%%%2% ） $ 西北农林科技大学生命科学学院 杨凌 ） （ 6#$#%% 摘 要：源自噬菌体 的 重组酶可以识别 的靶 序列 ，进行位点特异性的重组反应。为了简便地 J# E-+ 4!,G K15 !#$ 检测 酶在大肠杆菌中的重组活性，分别将 基因和上下游带有 的绿色荧光蛋白基因（ ）克隆到具有不 E-+ %’ !#$ ()* 同抗性的两种不相容质粒中，然后将构建的原核表达载体G:74%/8E-+ 和G:7$4,8 !# L*J 电击共转化大肠杆菌MN$# （ ），利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选。通过直接观察转化子的绿色荧光，便可以显示 酶 K:4 E-+ 的体内重组活性，并进一步通过 分析、质粒酶切鉴定进行了验证。结果表明：以 为报告基因、通过两 OKO8J5L: ()* 种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进E-+F !#$ 重组系统提供一种简便直观的检测方法。 关键词： 重组酶，共转化，不相容性质粒，绿色荧光蛋白 E-+ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） P94 5 %%%#83$%9 $%% %#8%#$8%! 源自噬菌体 的 位点特异性重组系统目前已 公司产品， （ ）及质粒 和 J# E-+F !#$ E(’C+@B + ) %!. MN$# K:4 G:74%/ 被广泛用于原核生物和真核生物体内、体外的基因操作，并 为 公司产品， （ 博士构建）