利用分子标记对桃_李_杏_梅_樱类植物系统发育的分析.pdfVIP

中国南方果树 　2003 ;32 (3) :45～50 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 45 利用分子标记对桃 、李 、杏 、梅 、樱类植物系统发育的分析 程 中 平[ 1 ,2 ] ( 1 中国科学院武汉植物研究所 　武汉 　430074 ;2 湖北省武汉市林业果树研究所) 　　提 　要 　采用 RA PD 技术 ,利用从 200 个 10 碱基随机引物中筛选的 22 个随机引物对桃 、李 、杏 、梅 、樱 类植物中的223 个试材进行了DNA 扩增分析 。结果表明:每个随机引物都能在桃 、李 、杏 、梅 、樱类 植物的DNA 扩增带中找到多态 ,但每类植物没有能区别其他类别的共有特征带 。对 22 个随机引 物 180 个位点上的 RA PD 带进行聚类分析 ,结合前人从形态学 、细胞学 、孢粉学和酶学的研究结果 , 认为桃 、李 、杏 、梅 、樱类植物可划分为桃属 、李属 、杏属和樱属 。 　　关键词 　桃 ;李 ;杏 ;梅 ;樱 ; RA PD ; 系统发育 　　桃 、李 、杏 、梅 、樱属蔷薇科核果类果树 ,在它们的分属上存在不同的意见 。Bent ham and [ 1 ] ( ) ( ) [2 ] Hooker 、许乃特 氏 C. K. Schneider 和佩来 氏 L . H . Bailey 将它们均划归为李属 ( Pr u n us L . ) ,然后再分不同亚属 ;俞德浚[3 ,4 ] 则将它们分为李属 、桃属 、杏属 、樱属 。随着科 学技术的进步 ,可以采用更多的方法从宏观到微观对于前人从形态学上的分类进一步进行研 究 。魏文娜等[5 ] 、王业遴等[6 ] 、唐前瑞等[7 ] 通过细胞学 、孢粉学 、酶学对桃 、李 、杏 、梅 、樱的亲 缘关系进行了研究 ,并且分析了它们的演化顺序 。 近年发展起来的分子生物学技术 ,使人们从遗传物质 DNA 本身去揭示生物内在本质的 东西成为可能 。笔者运用从 200 个随机引物中筛选得到的 22 个 10 碱基随机引物对 223 个 桃 、李 、杏 、梅和樱类植物进行了RA PD 分子标记 , 旨在为澄清他们的系统发育提供新的依据 。 1 　材料与方法 1 . 1 　材料 　从中国农业科学院郑州果树研究所、江苏省农业科学院园艺研究所 、北京市林业 ( ) 果树研究所及武汉市的一些地方采集供试材料 见表 1 。对采集的样品 ,直接用鲜叶提取 DNA ,或放在 7 . 2 ℃冰柜中贮存备用 。 [ 8 ] 1 . 2 　方法 　DNA 提取 :取采集的各桃种质幼嫩叶 1～2 片 ,依照微量提取法 提取 DNA 。 ( ) PCR 扩增及电泳检测 :应用筛选的22 个引物 见表 2 进行 PCR 扩增 。扩增条件采用经 μ μ ( 优化的反应体系 ,PCR 反应的总体积 25 l ,其中含 10 ×PCR 缓冲液 2 . 5 l ,MgCl2 25 mmol · - 1 - 1 - 1 ) μ ( ) μ ( μ ) μ ( l 2 . 0 l ,dN TP 2 mmol ·l