利用利福平抗性突变(i)选育L多Rf一巴高产菌株的研究.pdfVIP

氨 基酸杂志．4．1O—l3．1990 利用利福平抗性突变 (Rif)选育L一多 巴高产菌株的研究 王 烨 沈 萍 (武汉大学生物学系) 左旋多巴(Levodopa)，印B一3．4一二 有利于后续的分离纯化，否则由于L 酪氨酸 羟基苯丙氨酸，是用于预防和治疗帕金森 氏 和L 多巴的结构极为相似，等 电点 也极将 综合症 (Parkinsonis) 的有效药物，对精 接近而难 以将二者分开。但如果加^的酪氨 神病的治疗也有较好的效果 “。七 十 年 代 酸少，虽能1O0 的转化成L一多 巴，但却又 初，国外采用化学合成法生产L—Dopa， 但 不能达到高产的耳的。 工 艺复什，产物D ．L型不易 分 开 。微生 产量突变是一种综合突变，一般无直接 物不仅具有生长迅速，培 养 成 本 较低等特 选择标记，筛选的工作量十分庞大，效率极 点，而且催化系统具专一性 ，转化率高且反应 低。利福平是一种转录抑制剂 ，它是与RNA 条件温和。所 以利用微生物来生产 L—Dopa 聚合酶的p亚基结合而抑制转录，因此可以 已事在必然 ，日本学者HajmineYoshlda等 通过筛选刹福平抗性突变株而得到高转录水 发现Vibrio tyrosinotieusATCC19g?8 平的菌株， 以提高筛选高产量突变的效率。 和Pseudomonas 131elanoget111311 具 有 将 有报导表 明用利福平处理后的大肠杆菌的 日 酪 氨 酸 转 化为L—Dopa的能力 并且 和p 亚基合成有所增加 ．也发现用利福平 用亚硝基胍诱度 P．311elanogenu311，获得 一 处理的一些芽孢杆菌RNA聚合酶的构象发生 株转化能力较强的实变株，可~26mg／m1的 改变 。邱秀宝等曾用利福平选择亚硝基胍 L 酪氨酸转化为l4—15mmg／3111的L Dopa， 处理后的嗜碱性短小芽孢杆菌R115，使该菌 分子转化率为51．5—53．0％。苏联学者也分 产碱性蛋白酶的活性提高了2．14倍 “”。 离得到具有转化活性的菌株，但转化率很低 我们 以P．311altophilial35为出发菌 株 ． 。 我 国这方面的工作则刚刖开始 】， 彭 通过亚硝基胍和紫外线诱变处理，以利福平 珍荣，从法国里尔周围的大 田和 我 国黑龙 抗性为选择标记进行高产菌株的筛选 并研 江，内蒙，海南岛、武汉等地区的田地 中分 究了利福平抗性水平与产量的关系。 离和从国内外收集的菌株中，得到了37株具 材料和方法 有转化酪氨酸 为L．多 巴的菌株 ，其 中 以 P．mmaltophilia54的转化恬性最高 ，可将8．6 (一)菌株 t 嗜 麦 芽 假 单 胞菌135 mlg／mm1的L一酪氨酸 转 化 成8．2mg／mlL～多 (Pseudomonasma1tophilial35) ”． 巴，其转化率为95％ ”。 (--)培养基t 欲提高L一多巴的产量，关键在于菌种， 1．肉汤培养基；按参考文献 】口 即要获得能将更多的酪氨酸高效率地转化成 2．种子培养基 ( ) i葡萄糖1．82。 L一多 巴的菌株，其转化率一般要90％以上才 蛋白胨0．6，牛肉膏0．6，酵母膏0．3，NaCl i0 016， pH ．0