利用农杆菌系统将超甜定基因导入烟草IntroductionofThaumatinGeneintoTobaccothroughAgro.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)20(1):24--271998 利用农杆菌系统将超甜定基因导入烟草① 刘秋云② 贺竹梅② 曹 俊 李宝健 中（山大学生物工程研究中心，广州 510275) 摘 要 由pUR528构建中间载体pEHT9，再构建超甜定植物表达载体pBIT7。通过直接转化法将 pBIT7导人农杆菌，然后利用农杆菌系统转化烟草。经PCR,PCR-Southern和Southern杂交证实，超 甜定基因已整合到烟草基因组中． 关键词 超甜定，烟草，农杆菌，转化 中图分类号 Q943,Q78 IntroductionofThaumatinGeneintoTobaccothrough Agrobacterium-mediatedSystem LIUQiuyun HEZhumeiCAOJun LIBaojian (BiotechnologyResearchCenter,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275) Abstract pEHT9wasconstructedfrompUR528,andusedfortheconstructionofplantthaumatinex- pressionvectorpBIT7.ThenpBIT7wasintroducedtoAgrobacterium throughdirecttransformation. SubsequentlytobaccowastransformedthroughAgrobacterium-mediatedsystem.Ithasbeenconfirmed thatthaumatingenehasintegratedintothegenomeoftransgenictobaccobyPCR,PCR-Southernand Southernblotanalyses. Keywords Thaumatin,Tobacco,Agrobacteriumtumefaciens,Transformation 超甜定t（haumatin)是自然界发现的最甜的物质之一(l)。以重量为基准，其甜度为蔗糖的2000倍。超甜定是 一种蛋白质，它产于西非热带植物Thaumatococusdaniellii.该蛋白呈组织特异性表达，仅发现于上述灌木种子的 肉质假种皮。超甜定属一多基因家族，至少有7种分子量相近的蛋白质。这些蛋白质仅有5个或更少的氨基酸差 异。其中超甜定IIcDNA已被分离和测序 2〔)。 超甜定甜度高而卡路里值低，无毒安全，糖尿病患者亦可食用。尽管其仅对人、猿和旧大陆猴子有甜味，但仍 可作为家畜的饲料添加剂而促进增重cu．在西非，当地居民一直把T.daniell“的果实作为甜味剂加人到茶、酒和 其他食物中。目前，Tate-Lyle公司已有超甜定产品出售。日本制造商已用超甜定来改善口香糖、糖果、干海产 品和香烟的味道． T.daniellii在世界各地的引种尚不成功。为了大量生产超甜定，研究人员试图用微生物表达甜蛋白，结果 失败Ca（l。新西兰科学家M.Witty成功地在马铃薯表达了超甜定。由于采用了CaMV35S启动子，结果马铃薯的 ①广东省自然科学基金和国家教委博士后基金资助项目． ②刘秋云，贺竹梅两作者并列第一作者。刘秋云，男，34岁，博士，副教授，研究方向为植物分子遗传学； 贺竹梅 男、34岁，博士后，研究方向为植物荃因工程。 1期 刘秋云等：利用农杆菌系统将超甜定基因导人烟草 25 很多部位均有甜味4)〔。为了成功地在不同植物表达超甜定，我们以烟草为模式系统进行了尝试． 1材 料 与 方 法 1.1材料 1.1.1菌种和质粒 大肠杆菌E.coli菌株HB101,DH5：由本室提供，TG1由中山大学昆虫所刘彦文博士惠 赠。农杆菌菌株AGL1和质粒pBluescriptIlSK＋由澳大利亚R.＾Jeffers6n博士惠赠．pUR528由荷兰Unilev- erResearchLaboratoriumVlaardingen的＾．M.Ledeboer博士惠赠。pBI121由本室提供。 1.1.2植物材料