发根农杆菌转化龙胆再生植株的研究.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)14(5):27-291992 发根农杆菌转化龙胆再生植株的研究 刘伟华 徐香玲 李集临 （哈尔滨师范大学生物系，150030) 本文利用具Ri质粒的发根农杆菌 (Agrobacteriumrhizogenes)通过叶盘法对药用植物龙胆 G（e- nrianamanshuricsKitagaua）进行了转化实验，发根农杆菌 15834感染龙胆，诱发产生毛状根，并得到 再生的龙胆植株。冠瘦碱检测实验表明，再生植株显示甘露碱 (mannopine)带，说明发根农杆菌Ri质 粒的T-DNA部分已整合到龙胆植物细胞中。再生的龙胆丛生苗可以在不含激素的简化培养基上快速 繁殖，转化的龙胆植株具有发达的根系，根部龙胆苦贰含量比对照高，从而为东北龙胆栽培事业的发展 以及龙胆有效成份的工业化生产提供了基础资料。 关键词：Ri质粒，龙胆，转化 东北龙胆是黑龙江省重要的资源植物，也 大学基因工程实验中心提供。 是著名的中药，具有 “泻肝胆实火，除下焦湿热” 一（）东北龙胆无菌苗的获得 之功能。近年来由于掠夺性采挖，龙胆野生资 龙胆种子经 100ppm的赤霉素处理24小 源大量减少，已出现供不应求的局面，尽管国内 时，流水冲洗24小时，0.1% HgCI：消毒8分 曾有关于龙胆组织培养的报道，但繁殖系数低、 钟，无菌水洗 3-4次，接种于MS基本培养基， 成本高，难以在生产上应用 〔，，‘］，加之龙胆栽培 25℃条件下培养。 条件苛刻，因此，探讨龙胆的快速繁殖，有效成 （二）叶盘法转化实验 份的生产是十分必要的。 将龙胆无菌苗叶片切成5mm2的小块，在 近年来，人们对具Ri质粒的发根农杆菌转 MS液体培养基中250C摇床培养48小时，加人 化植物的研究逐渐增加12,［，一川。发根农杆菌转化 活化瓶过夜培养8小时的菌株 （注菌量为5- 植物具有使其产生大量毛状根的特点，转化的 10X106/ml)共培养48小时，然后转移到加有 细胞不丧失器官的发生能力，双子叶植物中由 梭辛青霉素0.5--lmg/ml的MS基本培养基 根部合成的次生代谢物都可以用发根培养物来 上，诱导毛状根的产生。获得毛状根后经离体 生产。因而利用发根农杆菌转化植物及建立发 培养再生植株。 根培养系，生产次生代谢产物 如（药物，天然色 三（）龙胆植株及根系的增殖 素，香料，天然调味品等）已日益受到重视。 龙胆植株及根系的增殖，分别采用 MS, 本文对发根衣杆菌转化龙胆进行了研究， 1/2MS1/4MS及简化的2多 蔗糖琼脂培养基 在诱导毛状根的基础上，由毛状根再生出植株， 进行培养，根的扩大培养采用相应的固体及液 并建立了一种新的龙胆无性快速繁殖系。 体培养基在光照、黑暗，离体和非离体等不同条 件下进行培养。 材 料 和 方 法 试验用东北龙胆 G（.manshuricaKitag.) LiuWethuaetal.:StudiesofAgrobacteriumrhi. 由黑龙江省中医学院中药系提供，发根农杆菌 zogenesTransformationRegeneration Plantlet ofGentianamanshurica. (A.rhizogenes)15834,A4,2659由日本筑波 本文于 1991年 1月25日收到。 ·么7 （四）冠瘦碱检测rri ，），表明测试样Gu能够合成甘露碱，从而说明 待测样品在 MS加精氨酸的液体培养基 发根