抗人Lpcliaion型前列腺素D合酶单链抗体基因的构建与表达.pdfVIP

· 182· 《现代免疫~)2005年第 25卷第 3期 抗人Lipocalin型前列腺素 D合酶单链抗体基因的构建与表达 朱国华 -一，陈德宇 ，黄宇烽 ，宛传丹 ，许晓风 。 (1．南京军区南京总医院生殖遗传室，南京 210002；2．南京师范大学生命科学学院，南京 210097) 摘要：利用RT-PCR技术 ，从稳定分泌抗人Lipocalin型前列腺素 D合酶 (Lipocalin—typeprostaglandinDsynthase，L-PGDS)单克 隆抗体的鼠杂交瘤细胞中获得抗体可变区基因；通过一柔性连接短肽[(Gly)-ISer】3，SOEPCR法将此重、轻链可变区拼接成 完整的抗人L-PGDS单链抗体基因，并装入表达载体pET-28a(+)，在BL21宿主菌中进行表达。经SDS检测显示，在低剂 量0．02mmol／LIPTG诱导和较低温度25cc或28cc条件下培养。重组菌表达了一定量的可溶性单链抗体。后经Ni—NTA亲和层 析柱纯化．得率为 2ms／100m1．纯度达 92％；双夹心ELISA和免疫荧光竞争抑制实验证实，纯化后的单链抗体具有较好的亲 和力和特异性。 关键词：Lipocalin型前列腺素D合酶；单链抗体 ；构