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一株高效高温菌的筛选、性质研究及初步鉴定1 1 1 2 1 1 1 秦蓉 ，李秀艳 ，李华芝 ，韩波波 ，黄民生 ，徐亚同 1.华东师范大学 环境科学系，上海（200062 ） 2.上海新东京(集团)有限公司，上海（200232 ） E-mail ：xyli@ 摘 要：从高温堆肥物料中通过平板培养法分离、纯化并筛选出一株高效高温菌YB16 ，YB16 具有同时分解淀粉、蛋白质、油脂、纤维素等大分子有机物的能力。经鉴定YB16 为革兰氏 阳性，杆状，有芽孢、荚膜，好氧，pH 生长范围为6-9 ，最适生长温度为65℃±2℃。通过 不同波长下的DNA 紫外吸光度比值的测定，得出YB16 的G+C mol%为50.66%。初步鉴定 YB16 属于嗜热芽孢杆菌属。 关键词：高温菌；筛选；降解能力；鉴定；G+C mol% 中图分类号：Q948 文献标识码：A 0. 引言 美国人Thomas Brock 于 1969 年首先从美国黄石国家公园分离出第一个严格意义的水生 栖热菌，真正揭开了高温生境生命研究的高潮。目前为止已有超过 30 属、80 种、近 400 株 高温菌被分离和描述[1] 。近二十年来,人们不断从火山口、温泉、海洋上升的热流以及人工的 热环境中分离纯化出许多高温菌。高温菌具有耐热嗜热的生活特性，它的酶有较高的热稳定 性，目前主要应用于石油开采、提供生物能源以及处理难降解有机物[2～3] 。因此，高温菌已 经成为一个热点研究领域。随着研究的深入，人们将不断发现新的高温菌，并开发利用它们 独特的生物学特性。 本文报道从高温堆肥物料中分离出一株能同时水解淀粉、蛋白质、油脂、纤维素等大分 子有机物的高温菌 YB16 ，并对其进行了形态特征、生理生化性质的研究，初步鉴定 YB16 属于嗜热芽孢杆菌属。 1. 材料和方法 1.1 材料 菌种来源：微生物分离源为经过最高温度 80℃的高温堆肥物料。 培养基[4] ：牛肉膏-蛋白胨培养基；大分子有机物水解培养基：淀粉水解培养基、油脂 水解培养基、蛋白质水解培养基、纤维素水解培养基；液体糖发酵培养基。 DNA 提取试剂盒：上海申能博彩生物科技公司的细菌基因组 DNA 提取试剂盒。 主要仪器：TL-18M 台式高速冷冻离心机；SW-CJ-1FD 型单人单面净化工作台；DKY-2 恒温调速回转式摇床；上海棱光 752N 紫外可见分光光度计。 1.2 菌株的分离纯化 把分离源制成不同稀释度的菌液。将稀释菌液涂布于在牛肉膏-蛋白胨培养基上置于培 养箱中 65℃培养。观察菌落特征及个体形态，将不同特征的单个菌落挑出，在相应的培养 基上划线培养直至纯化。经过多次重复过程，得到了纯的高温菌株。 1本课题得到上海市科委重大项目(06dz12006). 国家高科技研究发展 863 计划专项基金(No.2006AA06Z331). 的资助。 - 1 - 1.3 菌株的形态特征 个体形态：采用革兰氏染色、芽孢染色和荚膜染色,在光学显微镜下观察细胞形状、大 小、芽孢及着生特点、有无荚膜和革兰氏染色反应。 培养特征：将纯化的细菌划线接种于牛肉膏—蛋白胨培养基上,65℃培养24h,观察菌落 形态、大小、颜色、表面及边缘等特征。 1.4 生理生化试验 接触酶活性：挑新鲜菌落于 3 ％过氧化氢溶液中，形成气泡则为阳性，无气泡则为阴性。 氧化酶活性：用竹签挑新鲜菌落于用盐酸二甲基对苯二胺浸湿的滤纸上，60 秒内菌苔 变红为阳性，不变红则为阴性。 运动性：用接种针穿刺于半固体营养琼脂培养基接种试验菌，65℃培养24h 后透光目测 观察。 需氧性：方法同运动性实验。 糖酵解实验：将配制的培养基加入试管中，培养基用加入杜哈姆小管中，倒扣放入试管 中。 经过 48h 培养后，若培养基变黄色说明细菌利用糖类产酸，若杜哈姆小管中出现气泡 说明细菌利用糖类产气。 1.5 生长曲线测定