一步法双重RT.PCR检测SARS冠状病毒技术研究.pdfVIP

维普资讯 第 18卷 3期 中 国 病 毒 学 l8 (3)：232—236 2003年 6月 VIROLOGICA SINIGA June 20o3 一 步法双重RT．PCR检测 SARS冠状病毒技术研究 周敦金 ，唐少文 ，王 斌 ，杨华芬3 刁平 ，许 青3，刘 斌3，杨继红 ，2料 (1．武汉市疾病预防控制中心 ，湖北武汉，430022：2．中国科学院武汉病毒研究所，中国科学院分子病毒学重点实验量，，湖北武汉，430071； 3．武汉市传染病医院，湖北武汉，430022) One-stepDuplexRT-PCR AssayforDetectionSARSAssociatedCoronavirus ZHOUDun-jin，TANGShao—wen，WAN GBin，YAN GHua-fen，DIAOPing， XUQing，LIUBin， GJi—hong“ ，J．WuhanCentersforDiseasesPreventionandControl,Wuhan430022,China；2．TheKeyLaboratoryofMolecular Virology,WuhanInsitituteofVirology,TheChineseAcademyofSciences，Wuhan430071，China；3．WuhanInfection DiseasesHospital,Wuhan430022,China) Abstract：AccordingtoPCRprimersforSARSdevelopedbyW HOnetworklaboratorieswesynthesize 4primerpairs：BN1in—s／as、BNIout—s／as、SAR1一s／as、CORl／COR2andestablishassaysofone—step RT—PCR fordetectionofSARSassociatedcoronavirus．SpecificDNA rfagmentsas predictde were producde from specimenW 20bytheassaysusingall4primerpairs．whileonespecificDNA rfagment Was producde from specimenW lusingprimerpairBNIin—s／as．ThePCR productsrfom W 20were sequencde na d the sequence showed high identity to thatofallSARS associatde coronavirus in GenBank．whichshowedthatPCRproductsamplifiedfrom W 1nadW 20byourassaysWas specificfor SARS associatde coronavirus．Basde on theone—stepRT—PCR wedeveloped ofurone—step duplex RT—PCRofrma plifyingtworfagmentinonereactionbycombinationof4primerpairsabove．Andhte assaysofone—step duplex RT—PCR havehigherspecificity na dwerereliableofrdetection ofSARS assoc iatde coronavirus． Key、)Irds：SARS；Coronavirus；One—stepRT-PCR；DuplexRT-PCR；Detection 摘要：参照 WHO公布的PCR检测S