人尿嘧啶糖基化酶cDNA的克隆及其在食管鳞癌组织中的检测.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%% !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-./-01-2 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人尿嘧啶糖基化酶!#$ 的克隆及其在食管鳞癌组织中的检测 ! ! ! $ $ $ ! 鲍洪波 张传宝 王晋芳 周传农 刘 芳 赵晓航 钱世钧 ! （中国科学院微生物研究所，北京 !%%%8% ） $ （中国医学科学院肿瘤研究所 分子肿瘤学国家重点实验室，北京 !%%%$!） 摘 要 尿嘧啶糖基化酶是碱基切除修复过程的起始酶，对于维护基因稳定具有重要意义。在不同组织及不同细 胞周期中，该酶的表达水平存在差异。通过反转录EFG 克隆了人尿嘧啶糖基化酶的DH+I 编码序列，进一步以克 隆所得的已知J+K 基因拷贝数的重组质粒作为定量标准，通过实时荧光定量G73EFG 测定了食管癌病人手术切除 组织中尿嘧啶糖基化酶的0G+I 水平，探讨了尿嘧啶糖基化酶表达水平与食管癌之间的联系。 关键词 尿嘧啶糖基化酶，定量EFG，食管鳞癌 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） L58# I !%%%3%4! $%% %#3%#4!3%# 尿嘧啶 糖基化酶（ ， ； 量 为手段，从定量检测的要求出发，克隆了 + J2:D=) +3M)ND(@N):@- J+K G73EFG 。或称为尿嘧啶 糖基化酶， 的 编码序列（并以异源表达和序列测定 F O$ O$ O H+I C2:D=) J+K$ DH+I ， 。本文统一简称为 。）可 等方式检验了克隆效果），以此重组质粒作为定量标 H+I3M)ND(@N):@- JHK J+K 以起始碱基切除修复，从而在体内识别并切除H+I 准，并采用合成的特异性引物，检测了食管癌病人不 分子中最常见的异常碱基尿嘧啶，防止基因突变的 同类型手术切除组织中J+K$ （下文中J+K 均指 ［］ ! 出现 。 ） 水平，并探讨了 表达与食管癌之 J+K$ 0G+I J+K 人类的细胞核和线粒体中都存在着J+K，二者 间存在的联系。 都是由345 基因编码，只是由不同的启动子起始转 % 材料和方法 录并通过不同方式加工拼接从而产生了两种形式的 产物。 在线粒体中的形式 含 个氨基 材料 J+K J+K! %6 % % 酸残基，在核中的形式J+K$ 含! 个氨基酸残基。 % % %