人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及体外转染的生物学活性测定.pdfVIP

1·96 · 　第 18卷 　第 3期 医 学 研 究 生 学 报 Vo l. 18　No. 3 　2005年 3 月 Jou rnal of M edical Po stgraduate s M ar. 2005 ·论 　　著 · 人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及 体外转染的生物学活性测定 鲁雄兵 , 　周四维 , 　杨为民 , 　宋晓东 , 　罗 　刚 , 　孙 　凯 , 　曹正国 (华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 ,湖北武汉 430030) ( ) 摘要 : 　 目的: 构建人淋巴细胞趋化因子 HLp tn 真核表达质粒 ,在膀胱肿瘤细胞株 B IU 87 中表达重组质粒 ,并检 测趋化活性 。　方法 : 用 R TPCR 法自活化的人外周血淋巴细胞扩增 HLp tn含编码区序列的 cDNA ,克隆至 p GM T Ea sy T载体 ,测序正确后 ,将 目的片段插入 p cDNA 3. 1 ( + )载体 ,获得阳性克隆 p cDNA 3. 1 ( + ) HLp tn;用脂质体介 导其转染 B IU 87细胞 ,用 W esternb lot检测转染后细胞中 HLp tn 的表达 ;取转染后的上清液 ,采用 Boyden小室法检 测表达的 HLp tn趋化 CD4 + 、CD 8 + T淋巴细胞的生物学活性 。　结果 : 克隆的 cDNA 序列与 GenB ank 中 U23772 的 序列编码区内第 225位碱基不同 ,系同义突变 ,构建了真核重组表达载体 p cDNA 3. 1 ( + ) HLp tn;转染的 B IU 87 细 胞表达 HLp tn,其培养上清对 CD4 + 、CD 8 + T淋巴细胞具有趋化活性 。　结论 : 成功构建的 HLp tn 真核表达系统可 在人膀胱肿瘤细胞株 B IU 87 中表达 。 关键词 : 　淋巴细胞趋化因子 ; 　克隆; 　真核表达 中图分类号 : 　Q782　　　文献标识码 : 　A 　　　文章编号 : (2005) 030 19604 Con struction of hum an lym photactin eukaryotic expre ssion vector and detecting of chem otactic activ ity after be ing tran sfected in vitro LU Xiongbing, ZHOU Siwei, YANGWeim in, SONG Xiaodong, LUO Gang, SUN Kai, CAO Zhengguo (D ep a rtm en t of U rology, Tongj i H osp ita l, Tongj i M ed ica l Colleg e, H uazhong Un ivers ity of S cience and Technology, W uhan 430030, H ubei, Ch ina) A b stract: 　O bjec tive: To con struct an eukaryotic exp re ssion vector con tain ing hum an lymp hotactin ( HLp tn) cDNA and to exp re ss it in hum an b