小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察.pdfVIP

山东大学细胞生物学实验报告 山东大学实验报告 2011 年5 月25 日 科目 细胞生物学实验 题目小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察 仪器编号 105 一、 实验目的 1、了解快速制备动物染色体的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体的制备方法； 2、观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征； 3、掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。 二、 实验原理 (一) 染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本 无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的 先决条件。 染色体的制备在原则 上可以从所有发生有丝 分裂的组织和细胞悬浮 液中得到。最常用的途径 是从骨髓细胞、血淋巴细 胞和组织培养的细胞中 制备染色体。本实验采用 的方法是从小鼠的睾丸 细胞中获取。 染色体的形态结构 在细胞增殖周期中是不 断地运动变化的，一般在 有丝分裂中期，染色体的 形态最典型、最易辨认和 区分。因此，制备染色体 标本获取的是中期细胞。 图一：染色体的形态类型 染色体特征： 1. 数目（2n=？） 2. 长度（绝对长度、相对长度） 3. 着丝粒位置（M\SM\ST\T） 4. 随体与次溢痕的数目、大小和位置 5. 带型分析 (二) 操作方法 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织 （由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。 利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。在小鼠睾丸中， 细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠 睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行 1 山东大学细胞生物学实验报告 染色体组型分析。 减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。哺乳动物在性成熟以后， 精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时 都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于 分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 (三) Giemsa 染色法 MGG 由May-Grunwald 染料和Giemsa 染料组成。前者化学名为曙红亚甲基蓝Ⅱ，对胞质着色较 好；后者对胞核着色较好。因此MGG 染色，可兼两者的优点，常用于细胞涂片染色。  染色结果： 染色将细胞核染成紫红色，细胞质和核仁染成蓝紫色。  其优点： 染色方法简单，且兼有瑞氏、姬氏两种染色的优点，并且涂片可 保存十多年而不退色。MGG 染色对胞质胞核染色效果均较好，结构清晰，所染细胞亦比HE 染 色的细胞大；同时对细菌、霉菌及胆固醇结晶的显示也很清楚。因此适用于淋巴造血系统的细胞标 本、胸腹水、穿刺标本等。尤其对鉴别恶性淋巴瘤的类型，MGG 染色更有帮助。 三、 实验仪器 1. 注射器（1ml,5ml） 10. 盖玻片 2. 5 号针头 11. 显微镜 3. 解剖盘 12. 滤纸 4. 解剖剪 13. 擦镜纸 5. 镊子 14. 棉花 6. 玻璃吸管 15. 量筒 7. 1