AC转CBFI基因草莓%27哈尼%27向栽培草莓%27土特拉%27转移外源基因地研究.pdfVIP

AC转CBFI基因草莓‘哈尼’向栽培草莓‘土特拉’ 转移外源基因的研究 金万梅‘董静刘燕张玉平潘青华 北京市农林科学院林业果树研究所，北京，100093 摘要：以转CBFI基闪的草莓“哈尼”为父本，以将通戚培晶种‘十特拉’为母本，获得 杂交后代。种子经抗生素筛选后，翻I性株系通过PCR检测，在转育成功的杂交后代中可扩 增出一条640 bp的目的基冈条带，说明通过有性杂交可以将转基冈草莓中的外源荩冈CBFI 转移剑将通的栽培品种当中。研究了对照与转育材料的抗寒性，发现通过彳f性杂交。转育 成功的植株抗寒性提高了。 关键词：草莓，转录冈子CBFI，转育，抗寒性 低温对农作物的栽培、产量、品质和采后运输等均有较大的危害，严重时会 造成农作物的减产甚至绝收【卜2I。因此，培育具有抗寒能力的作物足农业上的一 个重要课题。目前越来越多的证据表明抗寒性是受微效多基因调控的，所以导入 个别的抗寒相关基因，往往对耐寒性的提高没有显著的效果。刘强等13l认为一个 转录因子可以调控多个与同类性状相关的基因的表达，增强一个转录因子的作 用，就可通过它促使多个功能基因发挥作用，从而使植株性状获得综合改良的效 果。CBFl是一个调节多个耐寒基因的转录激活因子，其在植物体内过量表达， 会使一系列与抗寒性相关的COR基因得以表达，从而提高植物对寒冷的抵抗力。 前人对转基因材料中外源基因的遗传表达特征研究较多，但对获得的转基因 材料进行杂交转育研究较少。转基因植物中的外源基冈在同种植物材料fHJ可以杂 交转育，对于一些已经获得转基因材料的目的基因，可以通过有性杂交将目的基 因转移到其他外植体再生比较难的品种中，这一方法是获得具有转爆凶目标性状 新品种的一条简便快捷的有效途径。 ananassa 草莓(FragariaDuch．)是蔷薇科草莓属多年牛的草本植物，是一种经 济价值较高的水果，在世界许多国家广泛栽培。草莓可白花结实，异花授粉结实 率也较高。因此对于草莓中难以再生的基因型可以通过杂交转育获得外源基因从 而达到改良的目的。我们实验室利用根癌农杆菌介导的叶盘法将来自拟南芥的冷 本研究由北京市自然科学基金项N(5052010)资助 ·通讯作者。 诱导转录激活因。-f．CBFl(C．repeatbindingfactor)基因成功导入草德中，获得了抗 寒性增强的转基因草莓14I。奉试验试图通过有性杂交将转基因材料中的外源基因 CBFI转移到其他的普通栽培品种当中，更好地为育种服务，为人工创造新种质 的利用提供科学依据。 l材料与方法 1．1材料 供试材料‘二卜特拉’，取自北京市农林科学院林业果树研究所的草莓资源圃， 栽植在温室内作为母本：通过根癌农杆菌介导的叶盘法得剑的转CBFI基因的 “哈尼’’转基因株系80作为父本。 1．2转育材料的获得 转CBFI基因的‘哈尼’转基因株系80与草莓栽培品种(非转基因材料)‘土 特拉’花期杂交。父本花蕾套袋，待其丌始散粉时，选择处在花蕾期的‘土特拉’ 植株，用经过70％的酒精消毒处理过的镊子去雄蕊，将转基因材料80的花粉均 匀的涂抹在‘土特拉’花莆的柱头 上，套袋。待其果实成熟收获种子备用。 1．3筛选培养基的确定 筛选的基本培养基为MS培养基，PH值调至5．8，并经过121～126℃高压灭 菌20 min，冷却至55C时加入卡那霉素，卡那霉素的浓度依次是0 mg／L、10mg／L、 20 mg／L、30mg／L、40mg／L、50 mg／L，将草莓种予接到上述浓度的筛选培养基 中，观察记录其出芽，黄化，发真叶的情况。 1．4杂交转育种子抗性筛选 d。 将杂交后代的草莓种子置于三角瓶中，55℃的水浸泡10min，气乏温浸种3 倒去多余的水，将材料拿到超净工作台，用70％的酒精消毒30S，用无菌水冲沈 5 min，再用0．1％的升汞消毒10 min，然后接