鸭A-FABP基因的克隆和其组织表达差异性研究.pdfVIP

中国家禽业——机遇与挑战 鸭A-FABP基因的克隆及其组织表达差异性研究’ 张军1，董飚1，张红1，储冬生1，徐国庆1，龚道清p， 段修军2，赵旭庭2，顾志良s (1．扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009；2．国家级水禽种质资源基因库， 215500) 江苏泰州 225300；3．常熟理工学院生物系，江苏常熟 摘要：本文旨在获得鸭A-FABP基因序列并进行序列分析，揭示该基因的组织特异性 该基因的组织特异表达规律。从35周龄母鸭脂肪组织中首次克隆了A-FABP基因的c胁 NA序列，长度为422bp，包含了一个399bp的完整CDS，编码132个氨基酸。该序列 与鹅、鸡的A—FABP基因序列约有94％的同源性，而相应氨基酸序列的同源性在92．4％ 以上；与人、小鼠、牛等哺乳动物A-FABP基因序列的同源性在73．4％～75．7％，而相 问脑、肺和肾组织中不表达；A-FABP基因在脂肪组织中的表达显著高于其他组织。A- FABP基因在动物进化中具有高度保守性，具有相似的生物学功能，该基因的表达具有 组织特异性。 关键词：鸭；A-FABP基因；基因克隆；序列分析；表达 现代肉鸭品种在生长速度加快的同时，也出现了体脂沉积增多的问题，过多的体脂沉积既 降低胴体品质，又造成饲料浪费。寻找候选基因用于鸭体脂性状的分子标记辅助选择已成为肉 acid 鸭育种研究的热点之一。脂肪酸结合蛋白(Fattybinding 内蛋白质，参与细胞内脂肪酸的运输，可将脂肪酸从细胞膜上运送到脂肪酸氧化和甘油三酯及 磷脂的合成位置。除细胞外液以及特定的细胞类型外，这些蛋白几乎存在于哺乳动物的所有组 心、脑、脂肪等组织中发现了FABP基因。这些基因是以第一次被分离和鉴定的组织来命名， 目前已经发现11种以上的类型。脂肪型脂肪酸结合蛋白(A_FABP)基因就是其中之一，该蛋 白分子量为14．1 于第2、4、8、3号染色体上[5]。鸡和哺乳动物均含有4个外显子和3个内含子，外显子高度同 源，内含子的长度在物种间存在较大差异。在脂肪细胞的分化过程中伴随着有关脂类代谢酶类 酯的形成以及脂溶解的过程中A-FABP储存或释放出大量的脂肪酸，从而参与调控生成及溶解 苷酸多态性(SNP)检测，发现4个单核苷酸突变，在所测群体中产生3种基因型，且基因型在 鸭群中分布存在显著差异[11|。为了更好地研究该基因，本文采用RT-P(、R技术从鸭脂肪组织中 克隆A_FABP基因序列，并检测该基因在鸭不同组织中的表达规律，为该基因的功能以及能否作 *基金项目：江苏省自然科学基金资助项目(BK2004055)、江苏省高校自然科学基金资助项目(06ⅪB230130)。 **通讯作者：龚道清，yzgoIlg@163．∞m。 366 第一篇遗传育种 为肉鸭体脂等性状的标记辅助选择奠定基础。 1材料和方法 1．1 实验动物及总RNA提取 取35周龄母鸭(昆山麻鸭)脂肪、肝、骨骼肌、心、脾、小肠、腺胃、肌胃、问脑、卵巢、 1．2分子克隆及测序 PCR 反转录按RNA RNaseFreed Buffer，7．5 H2 转录反应液组成为：4弘lMgCl2(25mmol／L)，2p110×RTp1 O，2弘l dNTP RNaseInhibitor(40 AMVReverseTran— MiXture(10mmol／Leach)，O．5肚1 U／耻1)，1肚l Primer(2．5 01igodT—Adaptor sampleRNA(总RNA≤