九节茶ISSR反应体系地研究.pdfVIP

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2017-08-22 发布于安徽
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九节茶ISSR反应体系地研究.pdf

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关于举办“第二届中草药提取关键技术与提取物产业应用”研讨会九节茶ISSR反应体系的研究郑郁善‘，黄宇，荣俊冬，陈礼光 (福建农林大学福建省中药材GAP工程技术研究中心，福建福州350002) DNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和浓度、7aq lJL Buffer、0．4mmol·L-idNTPs、2U 优化。结果表明，20 ISSR反应体系含：10XPCR 7aqDNA聚 umol·lJ 合酶、0．6 L_引物、5ng模板DNA。PCR扩增程序为：94℃预变性2min，94℃变性30 S，72℃延伸1 min，置4℃保存。应用该 S，44．8℃退火30 min，35个循环，最后72℃延伸7 ISSR体系对10份九：锚茶种质进行了扩增，证实了该体系的适用性和稳定性。关键词：九节茶；ISSR：反应体系；优化中图分类号：$567．1+9文献标识码：A Establishmentand ofISSRreactionofSarcandra optimization system g]abra ZHENGYu—shan，HUANGYu，RONGJun—dong，CHENLi—guang ofIndustrial and (Institute Forest，FujianAgricultureForestry 350002，China) Fujian DNAextractedfromSarcandraleavesasthe Abstract：Taking experimental genomic g]abra theISSR—PCR suchassuitable factorswhichaffected material，the amplification concentrationfor for DNA dNTPs，dosageTaq polymerase，theprimers，templateDNA，annealing and wereselectedand resultsshowedthatthe20llLISSR cycles optimized．The temperature reactionincluded：10×PCRmmol·L1 system Buffer，0．4 dNTPs，2U7a口DNApolymerase，0．6 Ilmol·u DNA．The PCR ificationwas：2minutes L‘primer．5ngtemplate optimalampl process followed with30 at94℃ at94℃forpredenaturation，thenby35cycles，eachseconds for secondsat44．8℃foranneal1 minuteat72℃for denatura