GST_GnRH_TRS融合蛋白_包涵体_的分离_纯化与复性研究.pdfVIP

西北农业学报 　2006 ,15 (4) :173～176 A ct a A g ricul t u rae B oreal iocci dent al is S i nica GSTGn RH /TRS 融合蛋白( 包涵体) 的分离、纯化与复性研究 1 2 3 1 4 5 金元昌 ,陈春岚 ,苏晓艳 ,李会东 ,令玉林 , 李景鹏 ( 1. 湖南科技大学生命科学学院 ,湖南湘潭 　4 1120 1 ;2 . 贺州学院 ,广西贺州 　542800 ;3 . 湖西科技大学附属医院 ,湖南湘潭 　4 1120 1 ;4 . 湖南科技大学化学化工学院 ,湖南湘潭 　4 1120 1 ;5 . 东北农业大学生命科学学院 ,黑龙江哈尔滨 　150030) ( ) ( ) 摘 　要 : 以人工合成的促性腺激素释放激素 Gonadot ropin relea sing hormone , GnR H / 转运肽 TR S 基因与 ( ) ( ) 表达载体 p GEX6p1 相连的重组子 p GEG 作为研究对象 ,转化大肠杆菌 BL 2 1 ED3 p ly S 。本文对 GST ( ) GnR H/ TR S/ BL 2 1 D E3 p ly S 工程菌的 GSTGnR H/ TR S 重组产物进行了诱导表达和分离纯化的研究 ,结 ( ) 果表明 ,该工程菌用 LB 培养基在 30 ℃扩增至 OD590 为 0 . 6 左右 ,加 IP T G 终浓度为 0 . 2 mmol/ L 诱导 3 . 5 h ,此时 GSTGnR H/ TR S 的表达量可 占菌体总蛋白的33 . 3 % 。重组产物绝大多数以 IB s 形式存在于菌体中。 ( ) 工程菌经溶菌酶破碎 、高速离心 ,得 IB s 粗制品后 ,再用 8 mL 1 % V/ V Triton X100 变性溶解 IB s ,离心取上 清 ,进行 Glut at hione Sep haro se 4B 柱一步法亲和层析 ,得到了纯度较高的 GSTGnR H/ TR S 融合蛋白,为进 一步研究和实际应用奠定基础 。 关键词 : GnR H ; 融合蛋白; 分离纯化与复性 中图分类号 :Q785 ; S852 . 2 1 　　　　文献标识码 : A 　　　　　文章编号 (2006) 040 17304 Study on Isolation and Purif ication and Renaturation of GSTGn RH/ TRS Fusion Protein ( IB) J IN Yuanchang1