L_乳酸生产菌_根霉菌的原生质体化及再生条件的研究.pdfVIP

江西农业学报 　2002 ,14 ( 1) :31～36 Acta Agriculturae Jiangxi 　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　 L - 乳酸生产菌 根霉菌的原生质体化及再生条件的研究 庄文王容 ,陈海晏 (南昌大学 生命科学与食品工程学院 ,江西 南昌 330029) 　　摘 　要 :对米根霉 AS3. 820 及少根根霉 AS3. 2893 进行了原生质体化及再生条件的研 究 。它们原生质体化及再生的最佳条件为 :米根霉 AS3. 820 : 蜗牛酶 、溶菌酶与纤维素酶 之比为2 ∶1 ∶2 ,酶浓度为2mg/ mL ,在30 ℃下酶解3h ;少根根霉AS3. 2893 :蜗牛酶 、溶菌酶与 纤维素酶之比为 3 ∶1 ∶1 ,酶浓度为 1mg/ mL ,在 30 ℃下酶解 3h 。稳定缓冲液为含 0. 7mol/ L ( ) 6 KCl 的0. 05mol/ L 的磷酸缓冲液 pH 为 6. 0 。在上述条件下 ,原生质体产量可达 1. 7 ×10 6 ～2. 0 ×10 个/ mL 。 关键词 :AS3. 820 ; AS3. 2893 ; 原生质体化 ;再生 ;条件 ( ) 中图分类号 : TS201. 3 　文献标识码 :A 　文章编号 : 1001 - 8581 2002 01 - 0031 - 06 L - 乳酸在食品工业中的应用 日益广泛[1～4 ] ,而由其制成的聚L - 乳酸 , 因其不仅具有生 物降解性 ,而且还有着与聚苯乙烯相似的光泽度及加工性能 ,因而由它加工生产的生物可降解 性塑料及绿色包装材料等有广阔的应用前景[5 ] 。获得产高纯度及高产量 L - 乳酸的发酵菌种 是这一切的根本 。原生质体融合技术 ,近年来应用十分普遍[6 ] ,其对于一些生产菌种的选育 , 效果明显[7～16 ] 。本研究即对根霉菌的原生质体化及再生条件进行了探索 。现报道如下 。 1 　材料与方法 1. 1 　实验材料 1. 1. 1 　菌株 　米根霉 AS3. 820 、少根根霉 AS3. 2893 由中国科学院微生物研究所提供 ,并经中 德联合研究院自然分离纯化 。 ( ) ( ) ( ) 1. 1. 2 　主要试剂 　纤维素酶 Cellulase 、蜗牛酶 Snailase 、溶菌酶 Lysozyme 均购 自上海生物 化学试剂商店 。 1. 1. 3 　培养基 　斜面培养基[17 ] :为 PDA 培养基 ;菌丝体液态培养基[6 ] :查氏培养基 + 0. 5 %酵 [6 ] ( 母浸出汁 + 0. 5 %蛋白胨 + 0. 05 %吐温 - 80 ;平板培养基 :为 CM 培养基 PDA + 1 ‰脱氧胆酸 ) [6 ] ( ) 钠 ;再生培养基 :为高渗 CM 培养基 CM 培养基 + 0. 6mol/ L NaCl 。 1. 1. 4 　溶剂 　稳定缓冲液为含 0. 7mol/ L KCl 且 pH 为 6. 0 的0. 05mol/ L 的磷酸缓冲液[18 ] 。 1. 2 　试验方法 6 1. 2. 1 　菌丝体培养 　取制备好的浓度为 1 ×10 个/