Real-Time+PCR探针法定量检测沙门菌方法的建立及应用.pdfVIP

中国人兽共患病学报 1004 2010，26(11) Chinese ofZoonoses Journal 1—1004—04 文章编号：1002—2694(2010)1 Real—Time PCR探针法定量检测沙门菌方法的建立及应用* 耿士忠，潘志明，方 强，丛秋霞，刘 杰，刘志成，文志发，焦新安 摘 要：目的 建立快速、特异性好、灵敏度高的Real—TimePCR方法定量检测沙门菌。方法根据编码沙门菌肠毒素 基因stn的核苷酸序列．设计荧光探针和一对引物，通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索，建立定量检测沙门菌 的方法。结果 建立的Real—TimePCR方法有很好的特异性与敏感性，所检测沙门菌结果均为阳性，而非沙门菌均为阴性； 标准曲线相关系数为R2=0．993，其敏感性为5CFU。运用该方法对108份鸡粪便、50份鸡肉以及58份水样进行检测，阳性 率分别为3．7％(6／108)、4％(2150)和3．4％(2／58)，与传统细菌分离检测结果相符。结论结果表明该方法具有简便、快 速、特异性强、敏感性高等特点，此研究为环境及疾病诊断中沙门茵快速检测提供了新方法。 关键词：沙门菌；Real-Time PCR；荧光定量；快速检测 中图分类号：R378．2文献标识码：A Establishmentand ofreal—timePCR application for ofSalmonella detection quantitative spp． GENG Shi—zhong，PANZhi—ruing，FANG Qiu—xia，I．IUJie， Qiang，CONG LIU Xin—an Zhi—cheng，WENZhi—fa，JIAO 225009，China) (-，iangsuKeyLaboratoryofZoonoses，YangzhouUniversity，Yangzhou establishreal—timePCR detectionof and ABSTRACT．．To Salmonella of fluorescent fo。quantitative spp．。apairprimers were tostn ofSalmonella thenareal—timePCRmethodwas es— probe designedaccordinggenesequence spp．，and successfully tablishedtodetectSalmonella the andreaction demonstrated spp．through ofreaction conditions．Results exploration system thatthemethodis andsensit