NisinZ的定点突变及突变体性质的研究.pdfVIP

19 卷 2 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol . 19 　No . 2 2003 年 3 月 Chinese J ournal of B iotechnology March 　2003 NisinZ 的定点突变及突变体性质的研究 　 1 ,3 1 ,2 1 1 1 ,2 袁 　静 　张振中 　杨 　巍 　陈秀珠 　还连栋 ( 1 2 ) 中国科学院微生物研究所 分子微生物学研究中心和 微生物资源前期开发国家重点实验室 ,北京 　100080 3 ( 西北农林科技大学食品科学与工程学院 ,陕西 　712100) 摘 　要 　以本实验室构建的含 nis Z 基因的质粒 p HJ201 为模板 ,采用定点突变技术将乳链菌肽 Z 分子中B 环第 8 ( ) ( ) 位 Thr 突变为 Ser T8S 、将第 2 位 Dhb 突变为 Dha 和第 31 位 His 突变为 Lys T2SH31K 以及将第 27 位 Asn 突变为 ( ) ( ) Lys 和第 31 位 His 突变为Lys N27KH31K , 以pMG36e 为载体 , 电击转化乳酸乳球菌 L . lactis NZ9800 进行表达 。对 表达产物性质的研究结果表明 ,3 个突变体的抑菌谱和溶解度未发生变化 ,其抑菌活性略有下降 ,但它们的稳定性 表现各不相同:N27KH31K 的稳定性与 NisinZ 几乎一致 ,而 T8S 和 T2SH31K 的稳定性有明显提高 ,在 p H9 条件下 100 ℃加热 5min 仍不丧失抑菌活性 。 关键词 　NisinZ , 定点突变 , 稳定性 ( ) 中图分类号 　Q754 　　文献标识码 　A 　　文章编号 2003 ( ) ( β 　　乳链菌肽 Nisin 是某些乳酸乳球菌 L actococcus 氨酸变为了 甲基羊毛硫氨酸 ,对黄色微球菌的抑 lactis) 产生的一种小肽 ,对许多革兰氏阳性菌有强烈 菌活性剧烈下降[4 ] 。本实验室从乳链菌肽高产菌株 抑制作用 ,是一种被世界 50 多个国家和地区广泛应 乳酸乳球菌 AL2 的基因文库中筛选到完整的乳链 用的高效 、无毒的天然食品防腐剂 。成熟的乳链菌 菌肽生物合成基因簇 ,并克隆和表达了编码乳链菌 肽分子由34 个氨基酸组成 ,分子量约 3510 。在生物 ( ) [5 ] 肽前体的结构基因 nis Z 。本论文采用已克隆到 合成过程 中 , 它首先在核糖体上合成前乳链菌肽 的 nis Z 基因为模板 ,利用定点突变技术 ,将乳链菌 (Prenisin) 分子 ,随后通过翻译后修饰在特定的位