the紫红笛鲷遗传多样性的aflp分析guidedownload.pdfVIP

维普资讯 第23卷第 5期 热 带 海 洋 学 报 Vo1．23，N0．5 2004年 9月 JOURNAIOFTROPICAIOCEANOGRAPHY Sep．，2004 文章编号：1009—5470(2004)050050～06 紫红笛鲷遗传多样性的AFLP分析 张俊彬，黄 良民 (中国科学院南海海洋研究所，广东 广州 510301) 摘要：针对广东、海南省4个不同地方(阳江、湛江、榆林、琼海)网箱养殖的紫红笛鲷 (Lutjanus argentimaculatus)群体和在三亚采集的野生紫红笛鲷群体，利用 AFLP分子标记技术分析我 国南方养殖的紫红笛鲷的遗传多态性。最适合的AFIP引物组合是 E+AGc／M+CAA，扩增 出的AFIP特征位点为]o7，养殖样品扩增出的AFIP的带数在54 74之间，野生样品扩增 出的AFLP的带数为63，4个养殖点紫红笛鲷的多态性标记百分率都超过了4O．OO ，呈现一 定程度的遗传多样性。总的来讲，4个养殖地的紫红笛鲷群体之间的遗传距离差异较小，但与 野生群体的遗传距离相对较大，UPGMA聚类分析明显将养殖群体与野生群体分开，表明紫红 笛鲷养殖群体已经与野生群体存在一定程度的遗传隔阂。 关键词：AFIP；紫红笛鲷；遗传多样性 中图分类号：Q75；Q959．483 文献标识码：A 紫红笛鲷 (LutjanusnrgPf nc“z＆f“s)为我国暖水性鱼类，主要分布于我国的南 海，在南海沿岸到南沙群岛的广大海区都有分布。紫红笛鲷是一种优质的食用鱼类，体型 较大，肉质好，紫红笛鲷的养殖在全球范围特别是在东南亚地区受到了极大的重视。 紫红笛鲷的种苗来源一直是制约其养殖业发展的瓶颈，尽管蔡泽平等Il】最近在紫红 笛鲷的人工繁殖技术上做了一定的工作，但我国大陆在紫红笛鲷的种苗培育等方面还缺 乏系统的研究，种苗的存活率很低。目前在我国南方，养殖的紫红笛鲷等多种经济鱼类的 种苗绝大部分来 自台湾省的人工繁殖场，近亲繁殖现象严重。近年来，养殖的紫红笛鲷个 体趋向小型化、生长缓慢，已经开始出现种质退化现象，紫红笛鲷品种的性状亟待得到改 良。对养殖的紫红笛鲷的遗传多样性和与野生群体亲缘关系的研究可以为品种的遗传改 良工作提供可靠的理论依据。 限制性长度多态性 DNA分子标记技术 (amplifiedfragmentlengthpolymorphism， 简称AFLP)最早由Zabeau等 【提出。它作为一种新的分子标记技术，是限制性 内切酶 片段长度多态性(RFLP)和随机扩增多态性 (RAPD)的结合，克服了RAPD技术的不稳 定性和RFLP技术受探针来源限制的制约。它既有RFLP的可靠性，也具有RAPD的方 便性，还具有重复性高、标记数多等优点 。AFLP的原理是基因组 DNA双酶切的限 制性片段的选择性扩增，主要程序是首先利用2种限制性内切酶双酶切基因组DNA，然 后将所产生的限制性片段2段分别连接一双DNA接头，接头长度一般是 14 18个核苷 酸，由核心顺序和内切酶位点特异序列组成，接头与基因组DNA的酶切片段相连接作为 收稿 日期：2003—0404；修订日期：2003—0723 基金项 目：国家 自然科学基金项 目；财政部特别支持的中国科学院 “区系分类”项 目(o10000002012) 作者简介：张俊彬(I971 )，男，湖北省天门市人，助理研究员，现从事海洋鱼类学研究。 维普资讯 第 5期 张俊彬等：紫红笛鲷遗传多样性的AFIP分析 5l 扩增反应的模板；最后根据DNA接头及酶切位点的碱基序列，设计一系列 3末端含数个 选择性碱基的聚合酶链式反应(PCR)引物．引物长度一般为 18-20个核苷酸．由核心序 列(与人工接头互补)、内切酶位点特异序列和选择性核苷酸序列3部分组成。扩增片段 通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测。大量的相关研究表明．AFLP是一种十分理想 的