发育生物学实验讲义.docVIP

实 验 讲 义 （实验报告只要求写前面两个） 课程名称：发育生物学 课程性质：专业限选课 课程类型：限选课 专业课 专 业：生物技术、生物科学 学 时： 32 24 生物科学与工程学院细胞遗传学实验室  目 录 实验一 小鼠的饲养与常规实验操作 4 实验二 小鼠的受精与繁殖 6 实验三 小鼠的胚胎发育与胚胎移植 11 实验一 小鼠的饲养与常规实验操作 一、实验目的与要求： 掌握小鼠饲养与一些常规实验的基本操作方法 二、实验原理 小鼠饲养是保证动物实验的前提。只有充分了解小鼠的生物学特性、生活习性和生理要求才能获得符合实验要求的小鼠。 三、实验用品 （一）、仪器、用具：饲养用具、注射用具等。 （二）、材料：小鼠 （三）、试剂： 生理盐水 四、实验内容与方法： （一）、饲养和管理 采用专用鼠笼进行饲养，鼠笼中应放置木屑，按照实验和管理的需要选择垫料应除满足四无（无毒、无细菌和化学污染、无尘埃、无味）和四不能（不能促进细菌繁殖、不能着色、不致伤、动物行为不受影响）外，还应满足能消毒、保证供给、便宜等特点。 小鼠的营养需要受遗传背景、疾病状况、妊娠及环境的影响。成年小鼠每天饮水6-7ML，而减少饮水会降低采食量。 （二）、体温与水的调节 按每克体重计算，小鼠的体重面积相对较大。因而，在环境温度变化时，小鼠在体温以及生理学上表现出较大的变化。小鼠不能耐受夜间的寒冷。 由于小鼠的蒸发表面积与整个身体相比所占的比例大，因此，对减少饮水比大多数哺乳动物更为敏感。小鼠水分代谢的生物学半衰期（1.1天）比大的哺乳动物更为迅速。呼出的气体在鼻腔内冷却以及尿液的高效浓缩，都有助于水分的保持。水分的保持能使热量稳定。如果小鼠依靠身体水分的蒸发以防止体温升高，就可能发生脱水导致休克。小数没有汗腺，而且它的唾液分泌能力也很有限。小鼠能变化体温，以部分地代偿环境温度的改变。例如，当环境温度从20度上升到35度时，小鼠体温能从33.8度上升到37.2度。关在笼子里的小鼠不耐热，在周围温度达到37度时就开始死亡。 小鼠的温度适中区随品系及适应性而异，但大约在29.6度—30.5度之间。但研究表明，小鼠在21度—25度的环境温度区内生长较快，窝仔数较多，并且比在适宜温度下饲养的小鼠更有活力。 （三）、腹腔注射 小鼠的抓取 腹腔注射 [腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下 五、作业 练习腹腔注射。  实验二 小鼠的受精与繁殖 一、实验目的与要求：掌握小鼠从受精到繁殖的一系列过程 二、实验原理 小鼠是多次发情的动物，每4-5天出现一个发情周期。在前情期和发情期排卵时阴道内的活动上皮发育到顶点。上皮的退化性变化发生在第三个阶段，随后间情期是一个静止期，或者细胞生长缓慢，可以用阴道上皮的变化判断发情周期，这常用于测定雌鼠对于交配和受精最适宜的接受力。 三、实验用品 （一）、仪器、用具：显微镜、载玻片、电子称、圆头滴管、小烧瓶 （二）、材料：雌、雄小鼠 （三）、试剂：生理盐水 四、实验内容与方法： （一）小鼠性周期的判定 取达到性成熟的雌性小鼠，每日上午7-8时开始检查。用左手拇指与食指将小鼠两耳及第3、4指将背部皮肤握住、小指按住尾部，使尾部向上。用圆头滴管吸少许生理盐水滴入阴道口，用左手指按压小鼠腰部，反复冲洗2遍后将生理盐水滴于载玻片上进行镜检。见下图阴道涂片变化表。 （二）受精与阴栓的确认 小鼠交配后4-5分钟，形成一种白色浆液性物质堵塞在阴道至子宫颈的腔内，称阴栓，它是由雄性小鼠精囊腺和凝固腺的分泌物在阴道内凝固而形成的产物，大的阴栓往往向外突出，小的在阴道内或子宫颈处，需要翻开阴道口才能查见，在交配后1小时阴栓渐渐软化，16-24小时后脱落，也有存在4-5小时，最多者存在48小时以上。从而可以在动物合笼后次日清晨检查阴栓，以确定是否进行交配，如有阴栓存在，该日即算妊娠零天。 （三）体重的测量 每日早上对妊娠雌鼠进行体重测量，制表观察到分娩时的体重变化情况。 （四）繁殖与影响因素 外部的影响，例如噪音、饮食、光照和群体密度在小鼠繁殖中起着重要的作用，并直接或间接地影响着下丘脑垂体轴对睾丸和卵巢机能的激素控制。 小鼠是自发性排卵，排卵并不伴随着每次发情，发情和排卵的周期性是由光照期的昼夜节奏所控制。交配、发情和排卵，最常发生于光照期的暗期。颠倒了明暗周期的时间，也就颠倒了发情、排卵和交配的时间。 在保持适当的环境条件时，一些近交系有效繁殖生命近两年。随着母鼠的老化，一窝产仔数（一般1至12只）通常会减少。所以，母鼠一般在一岁时即予淘汰。 五、作业： 制表观察妊娠期小鼠体重变化（