荧光原位杂交在环境微生物学中的应用及进展.pdfVIP

总第733期 高等教育在线 荧光原位杂交在环境微生物学中的应用及进展 慕庆峰 (黑龙江八一农垦大学农学院。黑龙江省163319) 摘要：随着科技的不断发展，在环境微生物学中荧光原位杂交技术被越来越广泛的应用。FISH技术是利用有荧光标记的特异性寡 核苷酸探针和细胞中相应的DNA相结合的方法，来达到检测和鉴定微生物的目的。这项技术是当前环境科学界研究的热点，本文 就对荧光原位杂交技术在环境微生物学中的应用和进展进行研究。 关键词：荧光原位杂交技术；环境微生物学；应用和进展 中图分类号：Q93-33 文献标识码：A 文章编号：1006-3315(2013J07—135—001 近些年来，随着分子生物学技术的不断发展，使得微生物学领 环境微生物种类众多，只有很小的一部分能够被培养，所以这种方 域的研究发生了很大的变革，借助分子生物学方法来进行微生物 式会使其多样性分析产生的结果具有局限性，有研究人员发现在 的鉴定和检测成为了现代微生物诊断以及生态学研究的重要手 不同的环境微生物研究中99％以上的微生物种类是不能够被培养 段。FISH技术是一种将分子生物学精确性、显微镜可视性的特点的。荧光原位杂交技术能够将微生物环境中的完整细胞景象信息 进行结合的技术，它也可以对微生物群落来进行评价。现在FISH进行再现还愿，精确度较高，因此在现在的微生物多样性的研究领 技术已经被很广泛的应用于环境微生物学中了，主要用于揭示微 域中被广泛的应用。FISH技术在近几年中，对于自然环境微生物 生物原位生理学功能和特性。 群落的研究成果比较明显，有对海水沉积物群落的研究结果，也有 一、荧光原位杂交技术概述 海水、河水、高山湖雪水中的浮游菌体、根系表面以及土壤之中的 (一)原理 寄居群落。荧光原位杂交技术不仅可以提供微生物在某一时刻的 荧光原位杂交技术是将核糖体内中高度保守、长度适中的 景象信息，还能够检测生物环境中微生物群落以及其种群动态。与 16SrRNA序列来作为理想的基因分类靶序列，然后根据这个序列此同时，FISH技术还被应用于鉴定和检测没有培养出来的种属和 的特异性、保守性来设计所需的不同级别和分类的寡核苷酸探针， 新种属，例如酸杆菌属、巨大硫酸盐细菌、全噬菌属等。这项技术已 并且对特意核苷酸序列中带标记的RNA或者DNA分子进行识经成为探究自然菌群生态学组成和群落对于自然、人为因素的动 别，这个探针和待检测的靶DNA是同源互补的，经过变性、退火、态变化的答应研究最有利的一种科技手段了。 复性的过程来形成核酸探针和靶DNA的杂交体。这种技术所使用(二)对硝化细茵的研究 的寡核苷酸探针是经过了荧光标记的约为20bp的特异性核苷酸 氨氧化菌和硝化菌的数量以及其空间分布式和微生物在硝 片段，并利用这报告分子和荧光素标记具有的特意亲和素间的免 化、反硝化的过程中所处阶段是相关联的，由此可见，对于生物处 疫化学反应，通过荧光检测系统来对要被检测的DNA进行定位、理系统中的硝化菌、氨氧化菌进行的研究是调控废水脱氮工艺想 定性和定量的分析。 要正常运行的重要参数。传统的研究方式步骤过多，有分离、富集、 (二)特点 分类、鉴定等，会耗费很多时间，这主要是因为硝化细菌在生理上 是一种十分特殊的化能自氧菌。FISH技术能够解决这类问题，在 作为一种非放射性的检测系统，FISH技术有其特有的属性和 优点： 很早之前就有研究者将这一技术引入到了硝化细菌检测中，建立 起了一套比较完善的硝化细菌的FISH检测法。随着时代发展和科 1．FISH是一种非放射性的检测系统，采用的是生物素标记探 针，避免了辐射性污染； 技的进步，人工