蛋白质剪接在蛋白质研究和蛋白质工程中的应用.pdfVIP

ChineseJournalNatureV01．34No． Progress of issn025301006 doi：10．3969／j 蛋白质剪接在蛋白质研究和蛋白质工程中的应用 戴旭东① 孟清②刘相钦@ of Bi ①博士研究生．②教授，东华大学生物科学与技术研究所．上海201620}③教授．Department ofMedicine，Dalhousie Scotia．CanadaB3H1X5 ology，Faculty University，Halifax．Nova 关键词 蛋白质剪接断裂蛋白质内含子蛋白质研究蛋白质工程 蛋白质剪接Iprotein tein)是指前体蛋白中的一段插入序列．它在瓷白质翻译后的成熟过程中能自我催化．使自身从前体蛋白中切除。并将 其两侧的多肽片段以肽键连接．形成成熟的蛋白质。蛋白质内含子的发现丰富了基因表达和蛋白质翻译成熟过程的 理论，而且在蛋白质研究和蛋白质工程中有广泛的应用。本文试图综述蛋白质剪接在蛋白质特异位点标记、蛋白质 片段化标记同位素、蛋白质环化、蛋白质芯片、基因治疗等研究中的应用。 蛋白质内含子(intein)是指前体蛋白中的一段插人 序列．它在蛋白质翻译后的成熟过程中能自我催化，使自 蛋白质内含子不同于RNA内含子．前者存在于蛋 身从前体蛋白中切除，并将其两侧称为蛋白质外显子(ex． 白质，后者则存在于mRNA前体。然而，蛋白质内含子 tein)的多肽片段以正常的肽键连接形成有功能的成熟蛋 白质[1-2]。截至到2011年8月，已经有500多种蛋白质 人到基因中，通过自身剪接从前体中剪接下来．将两边 的前体连接。另外，二者都包含核酸内切酶结构域，可 内含子(intein)被发现(inbase，http：／／www．neb．corn／ neb／inteins．html)[3]。它们分布在单细胞真核生物、细以通过类似的归巢机制在基因中转移。 菌、古细菌、噬菌体和病毒的基因组中，但是在多细胞生 物中尚未发现蛋白质内含子．而且它们主要分布在与 DNA复制、转录、翻译有关的蛋白酶或转移因子上，这可 能有利于蛋白质内含子的归巢(homing)和生存[4|。由于 蛋白质剪接能把两个多肽以一个天然肽键相连(spli． 圈1蛋白质剪接示意图… cing)．形成成熟的有活性的蛋白质，为蛋白质合成和翻译 后修饰提供了新的途径，因而蛋白质剪接已经被广泛的 1．2蛋白质内含子的结构 应用到蛋白质研究和蛋白质工程中。例如，这项技术可 每一个蛋白质内含子都包含N端剪接结构域和c 以应用到蛋白质特异位点标记、蛋白质片段化标记同位 端剪接结构域。N端剪接结构包含两个序列模块即A 素、蛋白质环化、基因治疗、蛋白质芯片等研究中[5_7|。 和B，C端剪接结构包含两个序列模块即F和G。除此 之外，标准蛋白质内含子在N端剪接结构域和c端剪接 1蛋白质内含子的生物学特性 结构域之间还存在归巢核酸内切酶结构域，由模块c，D 和E组成(图2)。模块A位于蛋白质内含子的N端，其 N端的第一个氨基酸残基非常保守，一般是Cys或Ser； I．1蛋白质内含子 模块G位于蛋白质内含子的C端，其c端的第一个氨 1990年，分别