PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 PRRSV-IPMA 抗体检测试剂盒的研制及应用 谭 斌 1，2 1* 1 1 2 1 1 ，刘长明 ，危艳武 ，张超范 ，冉多良 ，刘永刚 ，陆月华 ( 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001 ； 2. 新疆农业大学 动物医学院，新疆 乌鲁木齐 830052) 摘 要：本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) 用于检 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 抗体方法，研制成PRRSV-IPMA 试剂盒。对试剂盒的 感性、特异性、重复性及保存期等指标进行了 试验，并与进口试剂盒进行了对比。用IPMA 法检 PRRSV 试验接种猪血清抗体，第一周抗体检出率为50 % ， 于第二周起抗体检出率为 100 % ，未接种病毒对照组猪血清抗体检 均呈阴性。组装的PRRSV-IPMA 试剂盒与 国外IDEXX-ELISA 试剂盒对42 份血清进行平行检 的符合率为83 .3 % 。用本试剂盒对黑龙江、吉林、辽宁、 河北、上海等地 13 个猪场 520 份血清和6 个发病猪场送检的 80 份血清进行了PRRS 抗体检 ，8/ 13 猪场抗体 ； 100 % ；PRRS 对我国猪群危害严 阳性率大于50 % ，2/ 13 猪场为阴性 6 个发病场抗体阳性率分布在 57. 1 % 重。PRRSV-IPMA 试剂盒可为流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供一种可靠的技术手段。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ；免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) ；抗体检测试剂盒 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and 由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所分离鉴定； respiratory syndrome ，PRRS)是以母猪生殖障碍和仔 PRRSV 阳性和阴性血清本实验室自制；几种猪病毒 ； 猪严重呼吸困难为特征的一种高度接触性传染病。 考血清由本所其他课题组提供 Marc-145 细胞由国 本病于 1987 年在美国首次发现，1991 年荷兰中央 外引进，于37 ℃ 50 ml/L CO 条件下用RPMI 1640 培 2 ， 兽医研究所首次分离到病毒 1996 年我国首次报道 养液含100 mL/L 胎牛血清(FCS)和青霉素(100 IU/mL) 、 有本病发生。对本病的控制一直采取疫苗免疫与检 链霉素( 100 滋g/mL) ；辣根过氧化物酶 -SPA 标记物 疫清群的方法，特别需要一种操作简便、廉价省时 (HRP-SPA)及3- 氨基 -9- 乙基咪唑(AEC)为 Sigma 产 ； 的血清学技术，但目前国内 要依赖进口试剂盒满 品 HerdChek IDEXX-ELISA 试剂盒为美国富道产