光敏核不育水稻花药组织化学%2cCa2%2b与ATPase与定位研究.pdf

摘要 摘要 sativaL 光敏核不育水稻(Oryza japonica)是一种花药育性受光照调控的特 殊水稻种质，长日照条件下花粉不育，短日照条件下花粉可育，能一系两用，简 化了三系杂交水稻的生产程序，具有重要的育种实用价值与光调节的雄性不育机 sativaL CV． 制研究价值。本研究以光敏感核不育水稻农垦58s(Oryzajaponica NongKeng58s，PGMR)花药为材料，采用细胞组织化学方法对多糖和脂类物质的 定位、钙．焦锑酸钾沉淀技术、ATPase．磷酸铅沉淀技术，系统地研究光敏核不育 水稻可育和不育花药发育过程中多糖与脂类物质、钙离子和ATP酶的分布动态， 以求探索该种水稻花药育性转换受光周期调节的机理。研究结果如下： 1光敏核不育水稻花药的细胞化学观察 用组织化学的方法比较研究了可育和不育花药发育过程中的多糖和脂类的 分布动态，发现在造孢时期和母细胞时期，可育花药和不育花药中的多糖和脂滴 都很少，二者没有明显差异。在减数分裂时期，可育花药的药室基质的多糖增加， 但脂滴仍很少。不育花药中多糖和脂滴的分布与可育花药相比差异不大，只是不 育花药的四分体通常是线形的，而不是四面体形。小孢子早期可育花药中，小孢 子开始形成小孢子外壁，细胞质浓厚，细胞中含少量的多糖，细小的脂滴增多且 分布于细胞质中。绒毡层细胞中布满细小的脂滴，整个细胞显浅红色，呈现糖类 物质增多的迹象，显示出绒毡层细胞旺盛的物质代谢活动。在小孢子晚期时，可 育花药的绒毡层细胞中分布着较多的脂滴。接着二胞花粉中开始积累丰富的糖类 物质，为以后形成淀粉颗粒做准备。小孢子晚期绒毡层细胞内所含的脂滴己消失， 细胞内也无多糖分布。二胞花粉时期的绒毡层细胞已完全解体。到了成熟花粉时 期，花粉中积累了大量的淀粉粒。此时花药壁只剩表皮和药室内壁两层细胞。而 在不育花药的早期小孢子中，花粉壁被染成红色且发育不完整，细胞质稀疏，细 胞中无脂滴分布。小孢子早期不育花药绒毡层细胞中仅显示有一些多糖，没有脂 滴的积累。暗示着不育花药绒毡层细胞对脂类物质的转化发生异常，没有把吸收 的营养物质转化成小孢子发育所必需的脂类，造成小孢子不能形成完整的花粉 壁，影响小孢子的正常生长发育，最终导致花粉败育。由于小孢子败育，不能再 摘要 吸收利用绒毡层所分泌的营养物质，因而直到开花时，不育花药的中层和绒毡层 细胞仍保留。 2光敏核不育水稻花药发育过程中Ca2+的分布特征 可育花药发育过程中Ca2+的分布特征：(1)在减数分裂前、在小孢子从四分 体释放出来形成花粉外壁前和在小孢子晚期不等分裂前，药壁中的钙颗粒总是特 异性地增多；而在减数分裂后、在小孢子形成完整的花粉外壁后和小孢子分裂形 成二胞花粉后，药壁中的钙颗粒明显地减少了。药壁组织中的钙分布特征表明， 花药通过药壁细胞向药室中转运钙，供小孢子发育所需；Ca2+作为一种代谢物质 参与花药的发育调控，尤其是与小孢子转变过程中的重要事态有密切关系。(2) 从小孢子早期N-胞时期，在花粉外壁上一直分布了大量的钙颗粒；二胞时期在 靠近花粉外壁处形成花粉内壁，其中分布着一些细小的钙颗粒，表明Ca2+可能参 与了花粉内外壁的合成。而花粉成熟时，花粉外壁表面和萌发孔处积累了大量的 钙颗粒，则可能是花粉为以后花粉管萌发和生长做准备。(3)二胞花粉早期的生 殖细胞中钙颗粒比营养细胞要少，推测Ca2+在营养细胞和生殖细胞之间的分化及 其后的发育途径上可能起重要的调控作用。(4)母细胞时期药隔维管束开始分化 出导管细胞：从小孢子母细胞减数分裂开始N-胞花粉的整个发育过程，花药维 管组织中一直都聚集了大量的钙颗粒；N-胞花粉时，花药维管束中的钙颗粒进 一步增加；到成熟花粉时，花药维管束中仍聚集了较多的钙颗粒，但是数量比二 胞时期少。结合药壁细胞中钙颗粒的动态消长、乌氏体表面上的钙颗粒分布与绒 毡层退化解体，本文认为花粉所需的Ca：+可能通过维管束组织和导管细胞运送至 药壁组织，到达绒毡层后，通过乌氏体转移到药室中，聚集在花粉表面或进入细 胞质中参与调控花粉发育。 不育花药发育过程中ca2+的分布特征：减数分裂前，不育花药中的钙颗粒分 布与可育相比差异不大。减数