微流控芯片在肿瘤细胞学研究方面的应用.pdfVIP

·1398· ·综述· 微流控芯片在肿瘤细胞学研究方面的应用 张好余锋殷正丰 这种细胞间的异质性在肿瘤细胞中尤为 性分选法¨“。检测方法包括免疫学技 自1990年瑞士Ciba．Geigy公司研发 一种由化学分析所需部件集成的微型器 突出。尽管流式细胞术能够对大量细胞 术、基于RT·PCR技术和酶联免疫斑点 件以来，微流控芯片技术不断发展，现已 群体中单个细胞进行分析，但微流控技 被广泛应用于DNA分析¨…、蛋白质分 术将大大减少所需要的实验细胞数量， 析‘3…、细胞分析等研究口剐，几乎覆盖所 并且提供每个细胞更加精确的分析结 成为一个标准实验方案，于2004年被美 有实验室操作流程。微流控芯片把生物 果。 国食品药品管理局(FDA)准入临床应 和化学等领域所涉及的样品制备、生物 活性氧(ROS)在多种抗肿瘤药物诱用¨9‘。但现有的CTCs分离策略操作步 与化学反应、分离与检测等基本操作单 导凋亡过程中起着介导和调节作用。而 骤复杂，获得率和纯度都不够理想¨“。 元集成到一块几平方厘米的芯片上，因 抗氧化剂[如谷胱甘肽(GSH)]阻断细胞 ona 内ROS产生。抑制化疗药物诱导的肿瘤 于微流体学和免疫学的CTCs检测技术， 此又称为“芯片实验室”(Lab chip)。 它充分体现了当今分析设备微型化、集 细胞凋亡。对药物不敏感的肿瘤细胞胞 称CTC芯片(CTCchip)。微流控分选系 成化与便携化的发展趋势，并且具有快 内有较高的GSH水平。降低这些细胞统由压力泵、进样器和分选芯片组合而 成。芯片是一张与标准载玻片尺寸相同 速、高效、高灵敏度、高通量输出、低成本 内GSH含量可使胞内产生大量ROS，恢 消耗、低样品用量、可在线自动化批量操 复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性¨。”J， 的硅片，上面排列了78000个固相支持 作等诸多优点，是实验室分析的优良工 检测细胞内ROS和GSH水平能够预测物，支持物上包被了上皮细胞黏附因子 具‘”。 细胞对药物的敏感度。Sun等¨1应用微 (EpCAM)抗体。血液样本元需处理，样 ml。受检全血在空气 微流控芯片在细胞研究方面具有独 流控芯片分析肝癌细胞株HepG2的ROS本平均体积为2．7 特的优势哺．10J。芯片通道直径一般介于 和GSH含量。该芯片在玻璃上有一蚀 的推力作用下与CTC芯片表面紧致排列 10一50岬之间，与体内微血管和细胞大刻的“十”字通道，细胞和裂解缓冲液上 的支持物最大化接触，其中被EpCAM抗 小相近，且采用灌流培养方式，更接近于 样后，通过通道高度的设置控制细胞位 体捕获的细胞免疫染色鉴定后被确认为 体内复杂的微环境；可将诸多细胞研究 置。单个细胞固定于分离通道后经SDS CTCs，然后可以计数。由于全血未经任 步骤集成，实现操纵、观察、检测、培养细 溶解，电泳分离后进行结果检测。同样 何预处理，且CTCs在通过芯片的过程中 胞等功能以及程序的标准化；便于在微 是检测细胞中GSH含量，VanDijken绝对压力极小，整个操作过程简单温和， 小尺寸下实现高通量分析，节省时间和 等№1在微流控芯片上进行逆转录-聚合 从而使98．5％分离到的CTCs保持活力。 该方法不需要预先稀释、标记、固定或任 试剂。微流控芯片在肿瘤细胞学研究方 酶链反应(RT-PCR)，检测单个多发性骨 面的应用正逐渐受到重视，近年来已在 髓瘤细胞中特异的分子标记和染色体移 何其他处理，一个操作步骤就可从全血 单个肿瘤细胞分析、