动物传染病研究中PCR引物设计的技巧及相关软件介绍.pdfVIP

维普资讯 藐}72雾s Jm急f gx业iAgr生ic．Bi}S。ie学nc。 2Jouon8e年，2600月8 文章编号：1008—3464(2008)增一0072—04 动物传染病研究中PCR引物设计的技巧及相关软件介绍 磨美兰。，甘书钻 。 (1 广西大学 动物科学技术学院，广西 南宁 530005；2 广西区动物卫生监督所，广西 南宁 530001) 摘要 ：引物设计是 PCR技术 中最重要的一环。本文就引物设计前的准备工作、引物设计原则、引物设 计软件和方法等相关问题，介绍在动物传染病研究中设计 PCR引物的一些应用体会。 关键词 ：聚合酶链式反应 ；引物设计 ；技巧 ；软件 中图分类号 ：Q524 文献标识码：A SkillofPCR。primerdesignandprimer-designsoftwareinthestudy ofanimalinfectiousdisease M0 Mei—lan 。GAN Shu-zuant。 (1 CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 2 Guang~AnimalHealthInspectionInstitute，Nanning530001，China) Abstract：PCR—primerdesign isthemostimportantstep in polymerasechainreaction (PCR) technique．Preparationbeforehand，theprincipalandmethodofPCR—primerdesign，theusageskill ofpopularprimer-designsoftwareandsomecorrelativematterinthestudyofanimalinfectiousdisease wereintroduceddetailedly． Keywords：PCR；primer-design；skill；software 聚合酶链式反应 (PolymelaseChainReaction；PCR)又叫体外基因扩增技术或无细胞分子克隆 系统。自从 1985年 K．Mullis发明了PCR以来 ，该技术 已广泛应用于分子生物学、基 因工程、法医 学、肿瘤学、传染病学、遗传学及农业科学等领域 。在动物传染病研究中，与传统的检测方法如细菌 学、病毒学和血清学方法等比较，PCR方法具有特异性和敏感性高、操作简便 、快速高效等特点， 因此应用广泛。引物设计是 PCR技术中至关重要的一环，它决定着 PCR扩增的特异性 、扩增的效率 和扩增的保真度等。本文结合多位研究者的实验结果和笔者的多年来在实验过程中对引物设计的一些 经验体会 ，在此一并总结，供研究动物传染病及相关研究的同行参考。 1 引物设计前的准备工作 I．I 明确工作 目的，确定和了解所扩 目的基因及其特性 在开始设计引物前要明确工作 目的，首先要查 阅足够的文献，了解所研究病原的各个基 因的特 性。比如是打算作病原的快速诊断还是作病原的分子流行病学或变异性分析?是鉴别不同血清型的病 收稿 日期：2008—04—30。 基金项 目：国家 自然科学基金项 目 ；广西 自然科学基金项 目 (桂科青 0728003)；广西 区教育厅科研 项 目 (C150002)；广西大学科研项 目 (DD150032)。 作者简介 ；磨美兰 (1973一)，女，广西宾阳人 ，广西大学副教授 ，博士；E-mail：momeilan@gxu．edu．cn。 维普资讯 增刊 磨美兰等 ：动物传染病研究中PCR引物设计 的技巧及相关软件介绍 73 原或鉴别病原 的强毒株与弱毒株或鉴别疫苗株与野毒株?或者扩增病原的全基因组?是否用于下一步 克隆表达?为了达到以上研究