包装重组腺病毒Adncaml及其体外转染神经干细胞.pdfVIP

解剖学研究 2014年第 36卷第 5期 AnatRes，2014，Vo1．36，No．5 · 论 著 · 包装重组腺病毒Adncaml及其体外转染神经干细胞 李艳君， 李永明， 赵 勇， 田国忠， 黄昕艳 ， 孙 权 (佳木斯大学基础 医学院，黑龙江 佳木斯 154007) 摘【要】 目的 构建腺病毒载体，将 目的基因NCAM1转染入神经干细胞(NSCs)。方法 制备重组质粒，完成后与大 骨架质粒结合对293A细胞转染 ，包装成重组腺病毒载体Adncaml。对进行两次扩增 ，并检测滴度值。利用 Adneaml转染 NSCs。转染后应用QPCR、Westernblot对 NSCs中的NCAM1进行过表达鉴定。结果 Adncaml包装成功，两次扩增后 ，检测 滴度值为lxl0loPFU／mL。Adncaml对NSCs转染效果明显。进行过表达鉴定，QPCR检测 Adneaml转染效果为对照转染的 15倍以上 ．Westernblot检测转染效果为3倍以上。结论 重组腺病毒 AdNcaml成功的将 目的基因NCAM1转入NSCs。 【关键词】 神经细胞黏附分子； 神经干细胞； 腺病毒包装； 基因转染 PackagingofrecombinantadenovirusAdncamlandAdncamltransfectneuralstem ceHsinvitro LIYan-jun， LIYong- m g，ZHA0Yong，TIANGuo—zhong，HUANGXin—yon，SUNQuan．Collegeofbasicmedicine，JiamusiUnwe~i@，Jiamusi 154007，Chhta Correspondingauthor：LIYan-jun，E—mail：J fg幼@163．Com A【bstract】 Objective Constructrecombinantadenovirusvector，theNCAM1genewastransfectedintotheNSCs． M ethods Therecombinantplasmidwaspreparatedtransfected293A cellsbecomeAdncamlwiththebackboneplasmid． Aftertwo amplification，testingtitervalue．UsingAdncamltransfeetedwiht NSCs，anddeterminewhehterthegeneNCAM1wasoverexpres· sioninNSCsbyQPCRandWesternblot．Results Adncamlwaspackingedsuccessful，aftertwoamplification，Thetitervaluewas 1×10 PFU／mL． Th eeffectAdncamltransfectedwithNSCswasobvious．Th etransfectionefficiencywas15timeshigherthanthe controltransfectedby QPCR，Thetransfectionefficiencywas3timeshigherthanthecontroltransfectedbyWesternblot．Conclusion Successfulhterecomb inantadenovirusAdNcamltransfectedhtetargetgeneNCAMIintoNSCs． K【eywords】 Neuralcelladhesionmolecule； Neuralstemceils； Adenoviurspackaging； Genetransfection 随着全球人 口老龄化的到来 ．各种老年性退 体，优势在：第一取材丰富；第二培养容易；可克隆 行性病变明显增加 ，但中枢神经系统在损伤和退 扩增；第三易于保存 ；第四可不断的自我维持和 自 行性变后的自身修复能力是有限的。神经干细胞 我更新 ，使得转导的基因能稳定而永久地表达。 neuralstemcells，NSCs)被公认为修复神经系统 神