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喜马拉雅旱獭弓形虫病血清学检测.pdf
第 35卷 第 5期 家畜生态学报 Vo1.35No.5
2014年 5月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici May2014
喜马拉雅旱獭 弓形虫病血清学检测
乔海生,蔡其刚,马利青
(青海省畜牧兽医科学院,青海 西宁 81O016)
[摘 要] 用弓形虫的重组蛋 白GST—SAG1作为ELISA诊断抗原,采用 ELISA检测方法,
对青海省祁连县喜马拉雅旱獭血清进行 了弓形虫病的血清学检测。结果表 明,被检 92份喜马
拉雅旱獭共检 出阳性血清 25份 ,阳性率约为27.179/6。结果提示,青海省祁连县的喜马拉雅
旱獭中存在 弓形虫病的感染。
[关键词] 弓形虫病;重组蛋 白GST—SAG1;ELISA;喜马拉雅旱獭
[中图分类号] $811.6 [文献标识码] A [文章编号] 1005—5228(2014)05—0068—02
刚地 弓形虫 (Toxoplasmagondii)可专性寄生 蛋 白采用将编码 T.gondiiSAG1的基 因克隆到
于人和动物的除红细胞 以外的有核细胞 内,是一种 pGEX-4T-3质粒 ,然后转化到 E.coli的方法获取 。
重要机会致病性原虫 ,能够引起人和动物弓形虫病 再用 8M 的尿素缓冲液透析复性 ,然后作为诊断抗
(Toxoplasmosis)L1]。刚地 弓形虫速殖子期特异性 原在 T.gondii的ELISA检测中应用。
P。。蛋白,也称表面抗原 1(SAG1),能够诱导机体产 1.2.2 抗原的包被 包被液中(50mM Carbonate—
生 IgG、IgM 等多种细胞 因子 ,具有重要 的抗原 BicarbonateBuffer,pH9.6)分别按 5~g/mL剂量
性嘲。Dzierszinski等 。研究认为 P3o蛋 白可能是决 加人 GST和GST—SAG1抗原 ,混匀后以每孔 5O肚L
定弓形虫虫株毒力 的重要因素之一。 加 到 96孔平底微量板 (Castor)的孔 中,并且置 4℃
喜马拉雅旱獭是青藏高原分布广泛的一种野生 条件下孵化过夜 。
动物,可传播 鼠疫等致病微生物,严重威胁着当地人 1.2.3 封 阻 用含有 0.05 Tween2O的 1×
畜的安全。为了解青海省喜马拉雅旱獭体内弓形虫 PBS冲洗液冲洗 1次后 ,再用含 3 脱脂乳的封阻
病 的感染情况 ,本研究应用 弓形虫 的重组蛋 白 液 (3g脱脂奶粉+ 90mL蒸馏水+ 1OmL 1O×
GST—SAG1作为 ELISA诊断抗原 ,采用 ELISA检 PBS)进行封阻(每孔 100uL),并且置 37℃条件下
测方法,对青海省祁连县的92份喜马拉雅旱獭血清 孵化 lh。
进行了弓形虫病 的血清学检测 ,结果报道如下 。 1.2.4 加 样 用冲洗液冲洗微量板 1次,将标
准阴性 、阳性血清和被检血请在封阻液中按 1:100
1 材料与方法
滴度稀释后,每个样品每孔 50 L平行加到微量板
1.1 试验材料 的两个孔中,且置 37℃条件下孵化 1h。
青海省某地捕获旱獭 92只,现场心脏采血,立 1.2.5 加二抗 用冲洗液冲洗微量板 6次后 ,将
即离心(3000rpm,15min),分离血清,一20℃条件 用辣根过氧化物酶标记 的ProteinA抗体 ,在封 阻
下冷冻保存待检。谷胱甘肽巯基转移酶 (Glutathi- 液
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