喜马拉雅旱獭弓形虫病血清学检测.pdfVIP

第 35卷 第 5期 家畜生态学报 Vo1．35No．5 2014年 5月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici May2014 喜马拉雅旱獭 弓形虫病血清学检测 乔海生，蔡其刚，马利青 (青海省畜牧兽医科学院，青海 西宁 81O016) [摘 要] 用弓形虫的重组蛋 白GST—SAG1作为ELISA诊断抗原，采用 ELISA检测方法， 对青海省祁连县喜马拉雅旱獭血清进行 了弓形虫病的血清学检测。结果表 明，被检 92份喜马 拉雅旱獭共检 出阳性血清 25份 ，阳性率约为27．179／6。结果提示，青海省祁连县的喜马拉雅 旱獭中存在 弓形虫病的感染。 [关键词] 弓形虫病；重组蛋 白GST—SAG1；ELISA；喜马拉雅旱獭 [中图分类号] $811．6 [文献标识码] A [文章编号] 1005—5228(2014)05—0068—02 刚地 弓形虫 (Toxoplasmagondii)可专性寄生 蛋 白采用将编码 T．gondiiSAG1的基 因克隆到 于人和动物的除红细胞 以外的有核细胞 内，是一种 pGEX-4T-3质粒 ，然后转化到 E．coli的方法获取 。 重要机会致病性原虫 ，能够引起人和动物弓形虫病 再用 8M 的尿素缓冲液透析复性 ，然后作为诊断抗 (Toxoplasmosis)L1]。刚地 弓形虫速殖子期特异性 原在 T．gondii的ELISA检测中应用。 P。。蛋白，也称表面抗原 1(SAG1)，能够诱导机体产 1．2．2 抗原的包被 包被液中(50mM Carbonate— 生 IgG、IgM 等多种细胞 因子 ，具有重要 的抗原 BicarbonateBuffer，pH9．6)分别按 5~g／mL剂量 性嘲。Dzierszinski等 。研究认为 P3o蛋 白可能是决 加人 GST和GST—SAG1抗原 ，混匀后以每孔 5O肚L 定弓形虫虫株毒力 的重要因素之一。 加 到 96孔平底微量板 (Castor)的孔 中，并且置 4℃ 喜马拉雅旱獭是青藏高原分布广泛的一种野生 条件下孵化过夜 。 动物，可传播 鼠疫等致病微生物，严重威胁着当地人 1．2．3 封 阻 用含有 0．05 Tween2O的 1× 畜的安全。为了解青海省喜马拉雅旱獭体内弓形虫 PBS冲洗液冲洗 1次后 ，再用含 3 脱脂乳的封阻 病 的感染情况 ，本研究应用 弓形虫 的重组蛋 白 液 (3g脱脂奶粉+ 90mL蒸馏水+ 1OmL 1O× GST—SAG1作为 ELISA诊断抗原 ，采用 ELISA检 PBS)进行封阻(每孔 100uL)，并且置 37℃条件下 测方法，对青海省祁连县的92份喜马拉雅旱獭血清 孵化 lh。 进行了弓形虫病 的血清学检测 ，结果报道如下 。 1．2．4 加 样 用冲洗液冲洗微量板 1次，将标 准阴性 、阳性血清和被检血请在封阻液中按 1：100 1 材料与方法 滴度稀释后，每个样品每孔 50 L平行加到微量板 1．1 试验材料 的两个孔中，且置 37℃条件下孵化 1h。 青海省某地捕获旱獭 92只，现场心脏采血，立 1．2．5 加二抗 用冲洗液冲洗微量板 6次后 ，将 即离心(3000rpm，15min)，分离血清，一20℃条件 用辣根过氧化物酶标记 的ProteinA抗体 ，在封 阻 下冷冻保存待检。谷胱甘肽巯基转移酶 (Glutathi- 液