含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌（BC2007）的构建.pdfVIP

第 30卷第5期 江 西 农 业 大 学 学 报 Vo1．30，No．5 2008年 l0月 ActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensis Oct．，2008 文章编号：1000—2286(2008)05—0894—04 含几丁质酶基因的粪产 碱菌工程菌 (BC2007)的构建 陈 彬，郑斯平，郑伟文 (福建省农业科学院 生物技术研究所 ，福建 福州 350003) 摘要：从苏云金杆菌(Bacillusthudngiensu)中扩增出几丁质酶全长基因，通过克隆，测序得到2025bp的序列。 通过再线生物信息学软件，得到该几丁质酶的一级、二级、三级结构。将该基因通过电转化导人原核表达载体 pET29a，筛选到含该几丁质酶基因的BC2007。初步研究表明BC2007在含胶体几丁质的平板上产生了透明圈。 关键词：几丁质酶基因；粪产碱菌；原核表达载体pE329a 中图分类号：Q939．14 9；$482．28 文献标识码：A ConstructionofChitnianseGene TargetedAlcaligenesFaecal (BC2007) CHEN Bin，ZHENGSi—ping，ZHENG Wei—wen (InstituteofBiotechnology，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou350003，China) Abstract：Thechitinasegene(2025bp)fromBacillusthuringiensiswithhighchitinase—productingabil- itywasclonedandsequenced．Th eprimary，secondary andtertiarystructuresofchitinasewerepredictedusing thebioinformaticsoftwaresonline．Thechitiansegenewastransformed toVectorpET29abyelectropotation， hteengineeredstrainnamed BC2007 wiht chitinasegenewasobtainedand kept．Th epreliminary result showedhtathtestrainBC2007hasanabilitytodegradatehtechitinonhteplate． Keywords：chitinase；Alcaligenesfaecal~；vectorpET29a 0 引 言 粪产碱菌BC2001是一株由土壤分离的抗线虫生防菌株，对番茄、黄瓜、香蕉、柑橘等多种根结线虫 有很好的防治作用 ¨以J。近年来为了研究它在土壤中和根部的相互作用，对其进行绿色荧光蛋白标 记 J，并初步证明了它对线虫的致死作用是归因其产生的一种氰化物，对线虫有较强的毒性，具有构建 成为基因工程菌广泛用于生物防治的潜力。 用粪产碱菌BC2001研制成杀虫线剂在福建、北京等地试用，表明对番茄根结线虫，黄瓜和蛇豆的 根结线虫，柑桔根结线虫，柑桔办穿刺线虫，香蕉根腐线虫均有一定的效果…。但由于线虫虫体表面发 现有粪产碱菌BC2001杀虫物质难以渗透的几丁质 J，使其防效受到影响。如能将几丁质酶成功转入该 收稿 日期：2008—07—02 修回日期：2008—09—12 基金项目：福建省科技计划项目[闽科(2003)61号]和福建省农科院青年创新基金 作者简介：陈彬(1978一)，女，助理研究员，主要从事微生物生物技术研究， 通讯作者 ：郑伟文，研究员，E—mail： bcfaasO1．@ hotmail．como ． 第5期 陈 彬等：含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌(BC2007)的构建