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第八章 培养技术与过程建模 发酵控制目的 高的发酵水平 生产过程的稳定 成本控制 第一节 微生物发酵类型 分类依据 一、投料方式不同： 二、发酵与氧的关系 三、菌体生长与产物合成之间关系 四、代谢方式不同 第一节 微生物发酵类型 一、投料方式不同 1、分批发酵 2、补料分批发酵 3、连续发酵 4、半连续发酵 1、分批培养 是指在一封闭培养系统内具有初始限制量基质的一种发酵方式 。 特点： 一次性投料，经灭菌、接种后，在发酵过程中不再补料，直到放罐。 整个过程中菌浓、营养成分和产物浓度等参数都随时间变化。 迟滞期：菌体没有分裂只有生长，细胞形态变大，菌种进入新环境，细胞内核酸、酶等稀释，细胞不能分裂； 对数生长期：细胞内与分裂相关的物质达到一定程度，细胞生长代谢活性最强，细胞开始分裂，呈几何级数增加； 稳定期：培养液中营养物减少，废物积累，生长速率下降，生成率等于死亡率，细胞总数最高，细胞开始积累贮存物； 死亡期： 细胞死亡率大于生成率，有些细胞开始自溶。 对于初级代谢产物，在对数生长期初期就开始合成并积累； 而对于次级代谢产物，则在对数生长期后期和稳定期大量合成。 分批培养的优缺点 2、补料分批培养 也称半连续培养、流加培养，它是以分批培养为基础，间歇或连续地补加新鲜培养基的一种发酵方法。 特点: 一次或多次补入新鲜料液，延长产物合成周期，提高产量； 只有料液的加入没有料液的取出，所以发酵结束时发酵液体积比开始时有所增加。 补料的方式和控制 连续流加、不连续流加、多周期流加； 快速流加、恒速流加、指数速率流加、变速流加； 单组分补料和多组分补料等。 补料分批培养的优缺点 基质浓度低，避免快速利用碳源的阻遏效应； 避免在培养基中积累有毒代谢物，即代谢阻遏； 避免分批发酵中因一次投料过多造成细胞大量生长所引起的不良影响，降低发酵液粘度； 维持适当的菌体浓度，使不致于加剧供氧矛盾； 可以通过补料控制达到最佳的生长和产物合成条件；还可以利用计算机控制合理的补料速率，稳定最佳生产工艺。 缺点： 没有物料取出， 产物的积累导致生产速率下降； 染菌机会增加。 3、连续培养 发酵过程中，一边补入新鲜无菌料液，一边放出等量的发酵液，使发酵罐内的体积维持恒定。 达到稳态后，菌体浓度、产物浓度，限制性基质浓度都是恒定的，不随时间而变化。 连续培养的优缺点 优点： 发酵条件稳定 自动化程度高 设备效率高 设备使用寿命长 易于优化发酵过程 缺点 ： 易引起菌种退化； 染菌机会大大增加； 对设备要求高 菌体有挂壁和成团问题  杂菌污染问题 生产菌株突变问题 杂菌污染问题 连续发酵过程中，需要长时间连续不断地向发酵系统供给无菌的新鲜空气和培养基，这就不可避免地发生杂菌污染问题。 杂菌污染问题是连续培养中难以解决的问题。 生产菌株突变问题 微生物在复制过程中难免会出现差错引起突变，如果突变的结果使这一细胞获得在给定条件下高速生长的能力，那么它就有可能像杂菌一样，取代系统中原来的生产菌株，而使连续发酵过程失败。 4、半连续培养 在补料分批培养的基础上间歇放掉部分发酵液； 四环素发酵常用。 半连续培养的优缺点 优点：放掉部分发酵液，再补入部分料液，使代谢有害物得以稀释，有利于产物合成，提高产量。 缺点：代谢产生的前体物被稀释，提取的总体积增大。 二、发酵与氧的关系 1、需氧发酵：抗生素、氨基酸等； 2、厌氧发酵：乙醇、丙酮、乳酸等。 啤酒发酵设备 （厌氧发酵） 三、菌体生长与产物合成之间关系 1、生长关联型发酵 2、生长部分关联型发酵 3、非生长关联型发酵 1、生长关联型发酵 产物直接来源于产能的初级代谢，菌体生长、糖的分解和产物的形成几乎是平行的； 单细胞蛋白、葡萄糖酸的发酵。 2、部分生长关联型发酵 第一阶段：菌体生长阶段； 第二阶段：产物合成阶段。 柠檬酸发酵。 3、非生长关联型发酵 第一阶段：菌体生长阶段； 第二阶段：产物合成阶段。 抗生素、氨基酸发酵。 四、代谢方式不同： 1、初级代谢产物发酵 2、次级代谢产物发酵 初级代谢：生物细胞在生命活动过程中进行的与菌体的生长、繁殖相关的一类代谢活动。 初级代谢产物：微生物合成的主要供给细胞生长的一类物质，如氨基酸、核苷酸、乙醇、有机酸、多羟基化合物、糖类和维生素等。 注意事项 菌体进入发酵罐，其生长表现出：延迟期、对数生长期、静止期、死亡期等生长史的特征； 对数生长期的菌种移植到与原培养基组成完全相同的新培养基中，就不会出现延迟期； 为了缩短延迟期，宜接种对数生长期（中期）的菌种； 为了获得代谢产物，菌体尚未达到死亡期即行放罐。 条件控制 测定发酵过程中数据，以便对此过程进行有效的控制 具体目的：过程变量与预期是否一致