鸡类KISS-1基因克隆及EST序列表达验证分析.pdfVIP

鸡类KISS—1基因克隆及EST序列表达验证分析 韩威1,2李慧芳1朱云芬1宋迟1徐文娟1 1.中国农业科学院家禽研究所 扬州 225125 2.南京农业大学 南京 210095 摘要：性成熟启动是一个复杂的生理过程，受“下丘脑—垂体—性腺”轴(HPGA)控制。决定性 成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式释放增加，KISS—1基因编码 产物Kisspeptin——通过其受体GPR54能够直接刺激GnRH释放，进而启动性成熟进程，KISS—1/ GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因。禽类的KISS—1基因在GenBank中尚未被清晰 注释。本文以文昌鸡为素材，采用比较基因组学方法分析了不同物种KISS—l及其上、下游基因在染 色体上的分布，确定了鸡chr26:1522493-1532710区域为候选片段，通过PCR扩增和克隆测序获得 了该候选片段完整序列 （命名为类KISS—1序列）；同时，采用BLAST程序搜索出9个同源性在50％ ～85％的EST序列，通过拼接得到3个延伸EST序列。表达验证分析表明，3个延伸EST序列在文 昌鸡下丘脑组织cDNA文库中均有表达。 关键词：性成熟启动；鸡；KISS—1基因；EST序列 CloneofthechickenKISS—1likegeneandtheexpressionanalysis OfESTsequence HANWei1,2 ZHUYunfen1SONGChi1XUWenjuan1 LiHuifang1 1.Poultryinstitute,ChineseAcademyofAgricuhuralScience,Yangzhou225125,China; 2.NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing 210095,China Abstract:Pubertyonsetofanimalsisacomplexbiologicalprocessandunderthecontrolofthe Hypothatamic—Pitutay—Gonadalaxis.Theincreasedpulsatilereleaseofgonadotrophinreleasing hormonefromthehypothalamusisthedeterminedevent.Kisspeptins,encodedbyKISS—1gene,can directlypromote the release ofGnRH throughGPR54 receptorsand start the puberty processing.So,KISS—1andGPR54systemistreatedasthegatekeeperofpubertyonset.However, theavianKISS—1sequencesarenotinterpretedclearlyinGenBankdatabase.Inthisstudy, Wenchangchickenisusedasthematerial,andthechr26..1522493—1532710regionisdeterminedas thecandidatedfragmentsbyanalyzingthedistributionofKISS—1anditsneargenesonthe chromosomeindifferentspecies.TheintactsequenceisacquiredbyPCRandsequencing,calledKISS —1likesequence.NineESTswith50％～80％ similaritytothecandidatedfragmentsarefound,and threeprolongedESTsareacquired.TheprolongedESTsallexpressinthehypothatamieeDNAbank ofWenchangchicken. Keywords:PubertyOnset;Chicken;KISS— 1gene;ESTsequence