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基因治疗恶性血液病研究现状 闵凤玲综述 达万明 校审 （兰州军区总医院血液病研究所 兰州 730050） 80年代以来，伴随现代分子生物学，免疫生物学和肿瘤免疫学的飞速发展，基因治疗血液系统恶性肿 瘤倍受关注，基因治疗的概念也从过去对缺陷基因原位修复或异位替代拓展到把通过基因操作来调控某些 与疾病有关的基因表达并使之正常化，或导入细胞因子及其它功能基因，以发挥杀死肿瘤细胞、抗细胞增 殖、促肿瘤细胞凋亡或增强机体抗肿瘤免疫等。现就恶性血液病目前研究现状作一综述。 ㈠自杀基因的转入 病毒、细菌、真菌与哺乳动物不同，前者通常采取单一的代谢途径，而哺乳动物 细胞中含有编码多种酶的基因，执行体内各种代谢和能量转换，某种特异的酶常常是药物作用的靶位。药 物可杀伤或抑制带有该种酶基因的细胞，激活药物产生的毒性仅局限于具有激活药物酶基因的细胞及／或 其微环经经境中。这种激活药物的酶基因被称为自杀基因。据这一原理，人们给肿瘤细胞转入自杀基因， 使之对无毒或低毒的药物前体产生高度敏感性，从而选择性杀伤肿瘤，但对宿主细胞无害，因为宿主细胞 缺乏激活药物的该酶基因。常用的自杀基因有单纯疱疹病毒胸苷激酶 HSV-TK、胞嘧啶脱氨酶(CD)等。 Moolten(1)首次报告转入 HSV-TK 基因的肿瘤细胞，对丙氧鸟苷(GCV)高度敏感， 而且用转染后的肿瘤细 胞给小鼠注射后，用GCV治疗有效。Santodonato(2)等给小鼠接种表达α-INF的 Friend 红白血病细胞， 可以抑制 FLC 肿瘤的转移。如果用同时表达 HSV-TK 和α-INF 的 Friend 红白血病细胞系接种小鼠后，用 GCV 治疗，未见肿瘤发生，疗效 70～100%。最近 Bonini(3)将 HSV-TK 基因用于临床，证明转染 HSV-TK 的 异基因骨髓细胞骨髓移植临床。 他们对８例复发或EB病毒诱导的 ML，在接受去 T 细胞骨髓移植后在输注 HSV-TK 转染的供体淋巴细胞，5例产生有效抗肿瘤效应，3 例发生严重GvHD，用GCV治疗， 去杀灭 HSV-TK 转导的淋巴细胞。这说明通过对供者淋巴细胞的基因操作，可增加异基因骨髓移植的有效性和安全性，扩 大了其应用范围。 胞嘧啶脱氨酶(CD)基因也是一种自杀基因，其产物 CD 能将无毒的 5-FC 转化为 5-FU。5-FU 继续被转 化为单磷酸5-FU和三磷酸5-FU，阻断胸苷合成酶合成和mRNA 转录。Mullen(4)等用CD转染来源于C57BL/6 小鼠的弱免疫株和纤维瘤细胞，发现肿瘤生长受受抑，将上述瘤细胞皮下注射同基因小鼠，随后全身用5-FC 治疗，也取得了良好效果。 鉴于HSV-TK和CD的治疗效果令人鼓舞，其它一些自杀基因也相继被发现，如细胞色素P450、dck等， 为肿瘤自杀基因的治疗提供了更新的方法。 ㈡免疫基因治疗 主要包括细胞因子基因治疗和细胞因子联合基因治疗。前者主要是将各种细胞因子 基因，如 IL-1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、G-CSF、α-INF、γ-INF、α-TNF 等，转染细胞毒 T 淋 巴细胞(CTL)、肿瘤浸润淋巴细胞( TIL)等抗癌效应细胞、肿瘤细胞、造血干细胞等，借助细胞因子去激 活 CTL， 以补偿辅助 T 淋巴细胞不足，加强对低免疫原性肿瘤细胞的识别等。 后者是把两种或两种以上 有协同作用细胞因子基因或细胞因子与B7基因、主要组织相容性抗原(MHC)基因、抗原基因、自杀基因等 联合转染肿瘤细胞，达到改变肿瘤细胞表面免疫特性，更有效杀伤的目的。 Jiang(5)等将IL-2基因成功地导入髓系白血病细胞K562中，使之对LAK 细胞介导的细胞毒作用敏感 性提高。葛林阜(6)等观察了人 IL-6 基因转移的、能高分泌 IL-6 的 FBL-3 红白血病细胞对机体抗肿瘤免 疫功能的影响。结果发现高分泌 IL-6 的红白血病细胞接种小鼠体内后，能显著提高小鼠脾脏 CTL、NK 活 性及IL-2诱导的LAK 细胞活性，小鼠脾细胞诱生的IL-2、TNF 和GM-CSF 水平亦增高。 在研究提高抗癌效应细胞杀伤力的同时，人们也在探索如何增加瘤细胞的免疫原性，有效地激活机体 抗肿瘤免疫。MHC抗原在肿瘤免疫中起十分重要作用， 肿瘤抗原必须与 MHC 相连才能被识别和排斥，即双 重识别，反之，