荧光标记斑马鱼稚鱼耳石与效果及对抗氧化酶活力与影响.pdfVIP

摘要 荧光标记斑马鱼稚鱼耳石的效果及其对抗氧 化酶活力的影响 水产养殖专业硕士研究生许莉佳 指导老师 李云教授 摘要 随着水产业发展和渔业资源保护的需求日益增多，鱼类标忠技术也取得了很人进步，产 生了多种标志方法。但这些方法在标记仔稚鱼时存在很多的问题和不足，比如需要很长的时 间或较高的经济成本，而且每种标忠方法冈标记原因、标记强度和标记鉴定等总有这样或那 样的缺点与不足。鱼体所受的胁迫和致死率、标忠成本和劳动强度以及标志的检测和同捕效 果等是影响标志技术的重要冈素，而州荧光染料浸泡标记能够满足以上要求，并且可以在短 时间内实现人规模的标记放流活动。目前国内往研究Hj荧光物质浸泡标记水生动物时，多注 重对荧光物质浓度的选择，荧光物质的浸泡时间基本都定为24h，而对不同浸泡时间对耳彳i标 记效果的影响情况研究较少，尤其是在荧光物质浸泡标记鱼类时对其机体有无胁迫、损伤及 损伤程度等方面尚未见到有人报道。本研究选用国际标准水生实验动物斑马鱼为实验材料， 采用盐酸四环素和钙黄绿素浸泡标记斑马鱼稚鱼，确定适合标记斑马鱼稚鱼的荧光物质以及 最佳浓度、浸泡时间和浸泡方法；通过连续监测土要的抗氧化酶活性指标——超氧化物歧化 泡标记稚鱼耳彳i时对其机体产生的胁迫影响，在一定程度上确定该方法的安全程度，旨在探 讨安全有效的荧光标记方法，以期为研究水产动物增殖放流标记铬提供理论依据和实际参考。 论文主要研究结果如下： 1．盐酸四环素(TCH)适合删丁．斑马鱼稚鱼耳彳i的荧光标记，黄色荧光标记率高达100％、 标记效果良好且持久；在稚鱼的三对耳彳i中，以微耳彳i的荧光标记效果最佳、个体著异性最 (BP515·560)，其中黄绿光N2．1(BP515．560)检测效果更佳。 2．钙黄绿素不适丁．斑马鱼稚鱼耳彳i的荧光标记。钙黄绿素的绿色荧光与稚鱼耳彳i的白发 荧光颜色相近，不容易区分，荧光标记效果不显并、标记率低：但检测钙黄绿素标记效果的 两南人学硕十学伊论文 对良好的仍是微耳彳i，欠耳了i其次。 3．稚鱼(尤其是小日龄)阶段是适于荧光物质浸泡标记的阶段，胚胎时期的某些阶段可 能也适合荧光标记，但需要从浸泡后胚胎能否正常发育及出膜后鱼苗质量好坏等方面做进一 步的深入研究。 4．在一定范同内，稚鱼对荧光物质的吸收与浸泡液浓度、浸泡持续时间旱正相关关系； 在一定期限内，同一浓度浸泡处理后，荧光标记强度随稚鱼的生长而呈现逐渐增强的趋势。 5．通过研究TCH对稚鱼抗氧化酶活力的影响，能够得出——在本实验设置的浓度范围 内，TCH对抗氧化酶SOD、CAT和GSH．PxYt-有诱导作川；24h浸泡处理下稚鱼的抗氧化酶 活力高y-18h浸泡处理组，高浓度浸泡时间为24h时可能对稚鱼机体造成了一定的氧化损伤， 但这种损伤经过一段时间后能恢复止常；而中低浓度组浸泡时间为24h或TCH各浓度组浸泡 时间为18h时，稚鱼机体的抗氧化酶系统基本能清除胁迫产生的活性氧自由基从而避免机体 受到氧化损伤。 6．从荧光染料的成本、浸泡浓度及时间、标记效果及持久性、胁迫影响等方面综合评估， 对斑马鱼稚鱼，TCH溶液浓度为250mg／L、浸泡时间为18h时耳石荧光标记的效果最佳；TCH 耳石荧光标记的效果也非常显著。虽然后一处理可能会对鱼体产生一定的氧化损伤，但这种 损伤在较短的时间内能够恢复正常，因而往实际操作中也可予以考虑。 关键词：耳石标记盐酸四环素钙黄绿素斑马鱼抗氧化酶 Ⅱ AbstracI with JuvenileZebrafish Marking SubstancesandItsEffectson Mastercandidateof Aquaculture．Xu Lijia