猪肌肉生长抑制素基因表达规律及调控与肌肉生长量与关系研究.pdf

猪肌肉生长抑制素基因表达规律及其调控 与肌肉生长量的关系研究 (摘要) 瘦肉含量是猪肉品质的重要因素之一，动物的瘦肉率与其肌纤维细胞的数量和生 长密切相关，大量研究证明肌肉生长抑制素(MSTN)基因是影响动物骨骼肌生长发 育的重要候选基因之一。为了考察不同品种猪MSTN基因的表达规律及其表达量与肉 品质(尤其是瘦肉率)的关系，本研究包括以下几个试验： 基因为内标，研究汉普夏猪和长撒猪(长白×撤坝猪)在不同体重阶段(20kg、50kg 结果表明：猪背最长肌中MSTN基因的表达随体重的增加呈上升的趋势(尸O．05)； 相同体重条件下长撒猪背最长肌中MSTN基因表达均显著高于汉普夏猪(P0．05)， 重增加而提高，品种间差异显著，并且MSTN基因的表达量与瘦肉率、背膘厚存在显 著的相关性。 2．营养水平对猪肉品质和MSTN基因表达量影响的研究：选择平均体重为 处理6个重复，每个重复2头猪，两个处理分别饲喂高营养水平(DE=13．81MJ瓜g， 每个重复选择一头猪屠宰取样。结果表明：与低营养水平处理组相比，高营养水平处 VⅢ 本研究结果表明，营养水平能影响肉品质，但是对骨骼肌中MSTN基因的表达量没有 显著影响。 3．猪品种和营养水平对猪MSTN基因表达规律的研究：采用荧光定量PCR方法， 荣猪两种基因型猪分别饲喂按中国瘦肉型猪饲养标准和荣昌猪饲养标准配制的日粮， 和110kg时每个重复屠宰1头。结果表明：荣昌猪和长荣猪背最长肌中MSTN基因的表 达量随体重的增加呈上升的趋势；相同体重条件下荣昌猪背最长肌中MSTN基因表达 均明显高于长荣猪，而日粮营养水平以及日粮营养水平与猪品种的交互作用对MSTN 的表达量随体重增加而提高，品种间差异显著，日粮营养水平对MSTN基因的表达量 没有显著影响，并且品种和营养水平对MSTN基因的表达量的交互效应不显著。 4．肌肉生长抑制素主动免疫对肌肉生长量的调控：选择平均体重为25．池．1埏 健康、阉割的杜洛克×长白×大白三元杂交猪(DLY)27头，随机分为3个处理，即对 头。结果表明：在42d和84d时，高剂量和低剂量免疫组的血清肌抑素抗体滴度均极显 显地降低了猪骨骼肌中CK活性。60妇和100kg时，肌抑素主动免疫均明显降低了骨骼 肌中肌抑素基因的表达量，极显著提高了背最长肌肌纤维的直径和面积。由此可得出 结论：肌抑素主动免疫提高了血清肌抑素的抗体滴度和肌纤维的直径和面积，抑制了 肌肉中肌酸激酶的活性、以及肌抑素基因的表达量，进而提高了猪胴体瘦肉率。 5．肌肉生长抑制素蛋白酵母表达载体的构建：根据MSTN的全基因组序列设计 I和NotI。用RT．PCR方法扩增出目的片段，将 MSTN的特异引物，酶切位点为EeoR I和NotI进行双酶 扩增片段连接pMDl8．T克隆载体，然后采用限制性内切酶EeoR 切，通过定向粘末段分别连接同样酶切处理后的酵母表达载体pPIC9K，构建了MSTN 菌落PCR和酶切鉴定方法筛选阳性克隆进行序列测定。并采用在线生物分析软件对 IX 重组载体，为大量表达具有生物活性MSTN蛋白及研究准备了材料。 本研究结果表明：猪背最长肌中MSTN基因的表达量随体重的增加呈上升趋势； 瘦肉型外种猪的MSTN基因表达量明显低于脂肪性地方猪和含地方猪血源的杂交猪； 含地方猪血源的杂交猪的MSTN基因表达量明显低于地方猪；MSTN基因的表达量与 胴体瘦肉率呈极显著负相关。日粮营养水平对MSTN基因的表达量没有明显影响。肌 抑素主动免疫提高了血清肌抑素的抗体滴度和肌纤维的直径和面积，抑制了肌肉中肌 酸激酶活性和肌抑素基因的表达量，进而提高了猪胴体瘦肉率。 关键词：肌肉生长抑制素基因；表达规律；肉品质；调控；猪 X TheEffectsof Patternand ofPorcine Expression Manipulation