中间丝蛋白Nestin在肾小管上皮细胞转分化中表达与研究.pdf

复旦大学博士研究生论文 中文摘要 第一部分中间丝蛋白Nestin在间质纤维化动物模型肾小管上皮细胞 转分化中表达的研究 背景 肾小管间质纤维化是一系列慢性。肾脏疾病进展到终末期肾病的决定性因素 transition． 之一，肾小管上皮细胞一肌成纤维细胞转分化(Epithelial．myofibroblast EMT)在间质纤维化过程中发挥了重要的致病作用。巢蛋白(Nestin)属于第 VI类中间丝蛋白，可能在各种细胞骨架蛋白中起桥梁作用，参与调节整个细胞 骨架结构的稳定。我们先前的研究于国内外率先发现：在肾脏发育阶段，Nestin 一过性表达于分化未成熟的小管上皮细胞，而在分化成熟的小管上皮细胞中再无 表达。肾间质纤维化时，由于EMT过程涉及肾小管上皮细胞的去分化以及细胞 形态和迁移能力的改变，因而肾小管发育阶段曾表达的Nestin有可能重新表达 于肾小管上皮细胞并发挥一定的作用。因此，我们通过构建单侧输尿管梗阻 表达。 方法 对照，分别于手术后3天、6天、11天和14天处死大鼠。Masson染色观察大鼠 1、上皮细胞表型特异性标志物E． 间质纤维化情况，免疫组化法检测大鼠TGFIB 脏的表达；免疫荧光共染色检测Nestin和E．钙粘蛋白／aSMA表达的关系；实时 E． 定量PCR法检测大鼠皮质NestinmRNA水平；Westernblot法检测Nestin、 及E．钙粘蛋白、aSMA蛋白表达的相关性。 结果 与对照大鼠比，随着输尿管梗阻时间的延长，大鼠肾间质纤维化面积逐渐增 的面积出现纤维化，均有统计学意义(氏O．05)。UUO大鼠的间质和小管内出现 TGFIBl的表达。与此同时，随梗阻时间延长，UUO大鼠肾小管上皮表型E．钙粘 蛋白表达下降，11天时下降明显，14天时表达量几乎无法检测到(UUO川 vsCON 0．34j：0．041，UUOI们O．02士0．0071．19-a：0．087，PO．05)；肌成纤维细胞表型 同时，间质和小管部位先后出现Nestin的表达，荧光染色显示UU06天时大鼠 Nestin表达于E．钙粘蛋白缺失的小管上皮，并部分与aSMA共表达。随手术时 第2页共106页 复旦大学博上研究生论文 间延长，NestinmRNA和蛋白水平均呈时间依赖性增加。Nestin蛋白水平与间质 与E．钙粘蛋白水平呈负相关(F．0．816，P0．05)。 结论 (1)在UUO间质纤维化动物模型中，存在着肾小管上皮细胞的转分化；(2) (3) 伴随着EMT的发生，分化未成熟小管上皮细胞标志物Nestin再次表达； Nestin的表达与肾间质纤维化程度及细胞表型特异性标志物的改变密切相关。 关键词 肾间质纤维化，上皮细胞一肌成纤维细胞转分化，巢蛋白，E．钙粘蛋白，平 滑肌肌动蛋白a 第3页共106页 复旦大学博士研究生论文 第二部分Nestin在体外培养的人近端小管上皮细胞转分化中的研究 背景 肾小管上皮细胞是肾脏中生理功能最活跃的细胞之一，各种损伤因素，如缺 血、缺氧、蛋白尿以及免疫炎症均可导致小管上皮细胞的损伤，损伤的小管上皮 细胞发生活化，其细胞运动、迁移、吞噬等能力显著增强。而肾小管上皮细胞在 组织发生过程中与间质成纤维细胞具有同源性，在一定的病理条件下可以发生上 皮细胞一肌成纤维细胞转分化，直接参与肾间质纤维化损伤过程。Nestin作为中 间丝蛋白的一种，在调控整个细胞骨架蛋白网络结构的稳定性中具有一定的作 用，在肾脏发育早期，Nestin表达于分化未成熟的小管上皮细胞，参与其分化过 程。我们前一部分的动物研究已经证实，分化未成熟小管上皮细胞标志物Nestin 在肾间质纤维化小管EMT的过程中再次表