人参皂甙Rb1对大鼠胎鼠海马神经细胞凋亡地影响.pdfVIP

在NO抑制剂造成的高血压大鼠模型中观察到双氢毗啶类钙通道阻滞剂减轻了肾小球硬 化的肾问质纤维化。但Dworkin在单侧肾切除的白发性高血压鼠中络恬喜未能降低肾小 球内压及减轻肾小球硬化。 我们实验结果表明，汉防已甲素治疗肾病综合症大鼠使肾脏TcF一岛nmNA表达下 调，减少肾小球ECM沉积，延缓小球硬化。因此认为，汉防已甲紊通过下调TC,F一岛 表达而抑翻肾小球ECM产生，从而延缓肾小球硬化。 本课题受市科委“跨世纪人才基金”资助(NO．199蹦09) C,rants 本文获国际肾脏病学会Travel 人参皂甙Rbl对大鼠胎鼠海马神经细胞 凋亡的影响 朱陵群范吉平高籁邹忆怀贾亮何丽云张壮崔巍 ● 北京中医药太学东直门医院脑病研究室(北京，100700) 缺血性的神经元损害的病理生理机制迄今为止尚未充分阐明，可能与多种致病因素 有关，如兴奋性氨基酸过量释放、细胞内CB2+超载、自由基的产生有关。近年来研究 发现，～氧化氮(NO)在中枢神经系统损害中发挥重要作用，与细胞捅亡有关，有关 凋亡机制及抗摘亡药物的并发研究，是国内外研究的热点课鼯。人参皂甙RbI是从人 参中提取的有效成分，对缺血性神经细胞损伤有保护作用。本实验是通过培养大鼠胎鼠 海马神经细胞的模型．观察人参皂甙Rbl对神经细胞凋亡_倒影响，为缺血性神经元的 损伤提供实验依据。 1材料与方法 1．1材料 人参皂甙Rbl，购白中国药品生物品鉴定所；寥聚一L一籁氨酸、阿糖胞甙、L— methyl NAME(ni帅一L—aI翟iⅡim Hoechst33342购自Molecularhok公司。 1．2方法 ， 1．2．1培养神经元缺氧／缺糖损伤模型的建立及分组：孕18天的W洫ar大鼠，由 中国医学科学院繁育场提供。无菌条件下取出胎鼠置于培养皿中，断头取脑后，解剖显 微镜下分离出双侧海马，置含有0．125％的胰蛋白酶的D—Hanks液中，37℃消化20分 钟。加人含100m[／L胎牛血清的DMEM培养液中终止睦蛋白酶的作用．轻轻吹打使组织 97 分散成单细胞悬液．并经200目不锈锕筛过滤，以l×109／L的密度接种于0．01％多聚 一L一赣氨酸过夜处理的培养皿中，至37℃、S％C02的培养箱中培养，于接种的第三天 加^阿糖胞苛(终浓度为10／maol／L)处理24小时以抑制胶质细臆的增殖。取培养第lo 天的神经细胞用于实验，随机分为：A．损伤组：取培养10天的神经细胞用元糖Earle’ 8液置换，然后置于缺氧罐内充以95％№和5％c．02，罐内氧气含量低于1％，37℃培养 5小时，然后从缺氧罐中取出，将Eade’B液换为无血清的DⅧ琳培养液，置培养箱中 继续培养。B．对照组：不经缺氧／缺糖处理。C．L—NAME组；-100／∞ol／L于缺氧／缺糖 损伤时加入培养液中。 1．2．2凋亡细胞计数：收集细胞悬液，l(X)09离心5min，弃上清，沉淀用70％乙 醇悬浮，4℃冰箱内固定12h以上。取固定后的细胞用0．1uanol·L“磷酸盐缓冲液 (pH7，4)洗2遍并悬浮之，加入缍浓度为如rng·L～RNaseA，筇。c恒浴lh，再加^P【染 液至终浓度50mg·L～，摇匀后40C避光静置1E经尼龙罔过滤，在哟Calibur型流式 细胞仪上计数1()000个细胞，测定菩期纲臆DNA吉量并计算凋亡细胞所占比例。 J．2．，形态学研究：参照文献方法：细胞用Hoechst33342和H双染色15In面，用磷 酸缓冲液PBs洗一次，重悬于PBS中，用荧光显徽镜观察。 1．2．4LDH释放的现象：测定培养液中的LDH含量，并将相应的培养细胞置于一 30℃。3h以上，融解后以同法测定总LDH。神经细胞损伤程度以培养细胞释放的LDH 占总删的百分比表示。 2实验结果 2．1 Rbl对LDH释放的影响 神经细胞觖氧／缺糖损伤5小时后再给氧，U)H的释放显著增加，并随再给氧对同 的延长而增加，Phi能够减少LDH的释放，并随着荆量的增加而作有增强(衷】)。 哀1：Rbl对删释放的