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河南农业科学 利用降落 PCR扩增 KS基因 刘炳辉 ，曹远银 ，程 浩 ，闰建芳 ，齐小辉。，刘 秋 (1．沈阳农业大学 植物保护学院，辽宁 沈阳 110161；2．大连民族学院 生命科学学院，辽宁 大连 116600) 摘要：通过优化 SDS法提取链霉菌(Streptomycesspiramyceticus)和 2株 由生物技术与资源利用 国家民委——教育部重点实验室分离获得 的放线茵 D8和 D18基 因组 DNA，同时应用降落PCR 和普通 PCR扩增酮基合酶基 因(ketosynthase，KS)。结果表 明，扩增 出的特异性条带与 目的基 因 片段长度一致，降落PCR法较普通PCR法扩增KS基因特异性更高。使用普通 Taq酶，降落PCR 程序能明显提高PCR的特异性，它可用于扩增普通 PCR难以扩增的基因片段，或在假阳性难以去 除的情况下提高PCR的特异性 。 关键词：优化 SDS法；降落 PCR；退火温度 ；KS基 因 中图分类号：Q781 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—3268(2008)11—0087—04 TouchDownPCR forAmplificationofKetosynthaseGenes LIU Bing—hui～，CAO Yuan—yin ，CHENGHao ，YAN Jian-fang。，QIXiao—hui。，LIUQiu。 (1．PlantProtectionCollege，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110161，China； 2．LifeScienceCollege，DalianNationalitiesUniversity，Dalian116600，China) Abstract：Objective：TogettargetKSgenesbyasimpleandefficienttouchdownPCR (T【)- PCR)．Methods：GenomicDNA from threestrainsofactinomyceswasextractedbymodifiedSDS method．Theketosynthase(KS)genefragmentsfrom threestrainsofactinomyceswereamplified withtouchdownPCR and common PCR．Results：TargetgeneswereobtainedbyTD—PCR．The resultsindicatedthattouchdown PCR wasefficientinamplifyingthegenefrom threestrainsof actinomycesanditwasmorespecificthancommonPCR．Conelusion：TD-PCR withTagDNA polymerasehashigherspecificitythancommonPCR．ItcanefficientlyimprovespecificitYofPCR andbeusedtOclonegenefragmentswhicharedifficulttOclonebythecommonPCR method，or toincreasethespecificityofPCR whenfalsepositivityiSdifficulttoeliminate． Keywords：M odifiedSDSmethod；TouchdownPCR；Annealingtemperature；KSgene 聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction， 条件的设置 ，其 中Mg 浓度 、缓冲液pH值、循环条 PCR)是在模板 DNA、引物和 4种脱氧核糖核苷酸 件等因素均影响PCR的结果 ，其中退火温度更是至 存在 的条件下依赖 DNA 聚合酶 的酶促反应_1]。 关重要_3]。降落 PCR主要针对退火温度不确定的 试验中经常出现 2种情况 ：一种是 因未找到最佳扩 基因扩增 ，通过设计多个循环使相连循环的退火温 增条件导致产生大