络治对糖尿病视网膜微血管损伤修复作用的研究.pdfVIP

论文汇编 (Lucifer yellow)传输技术检测氯化锂、芹黄素对GJIC作用的影响；免疫荧光及real．timePCR技术 检测作用后细胞间缝隙连接蛋白43(CX43)及CX43mRNA的表达水平。 结果氯化锂和芹黄素能够增强细胞间荧光黄染料的传输，增强细胞间GJIC功能，免疫荧光和 RT-PCR显示氯化锂和芹黄素能够上调CX43蛋白及CX43mRNA的表达。 GJIC的功能，从而抑制体外培养的RTCFS增殖。 【关键词】缝隙连接细胞间通讯；兔眼Tenon囊成纤维细胞；连接蛋白43；芹黄素；氯化锂； 络治对糖尿病视网膜微血管损伤修复作用的研究 郭承伟 山东中医药大学附属医院眼科 DR是糖尿病微血管病变中最常见、也是最严重的并发症之一。前期研究显示，DR整体辨证属于 阴虚火旺或气阴两虚，晚期则转化为阴阳俱虚。目多细络，以血为本，病邪在络，多伤血分；而“病在 血，调之络”。因此，本文以络病为切入点，络脏兼顾，采用络刺结合药物治络，以求切中病机要害， 使药达病所。通过动物实验研究络治法对糖尿病视网膜病变微血管损伤的保护作用，并探讨其发生机 制，为临床提供新思路与治疗方法。 一、研究方法与内容 60只雌性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、羟苯磺酸钙对照药物组、络治组四组，每组15 只。除正常组不做处理外，其它各组均采用STZ腹腔注射制作DR大鼠模型，按大鼠体质量60mg／kg 的大鼠重复注射1次。如果2次注射后血糖仍然低于16．7mmol／L则剔除。注射后剪尾法获得大鼠的血 液样品，血糖仪测定血糖，超过16．7 mmol／L即为成功建立糖尿病模型，然后每月测一次空腹血糖， 血糖低于14mmol／L者剔除。 正常组不造模，正常喂养，自由饮水。 模型组造模成功后，按给药组 等量生理盐水灌胃，每日1次。羟苯磺酸钙对照药物组造模成功后，选用对照药物羟苯磺酸钙灌胃， 给药剂量为0．29／(kg，d)，每日1次。络治组造模成功后，采用络刺加大黄蠊虫丸灌胃给药。大黄蟪 虫丸给药剂量根据《实验动物用药量的确定及计算方法》经计算确定为O．29／(kg，d)，每日1次。络 刺根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的《实验动物穴位定位标准》取双侧太冲、百会。太冲位于 后肢足背第1、第2趾骨间凹陷处，直刺lmm；百会穴位于顶骨正中，向前或后斜刺2mm；将大鼠固 定器固定后，上述穴位常规消毒，以三棱针点刺致少量出血，每周1次，均于给药前1小时进行。不 行刺络的模型组、药物对照组亦经过抓取、固定等过程。整个试验观察时间为造模后24周。观测指 标有1．一般项目检测，包括体重、血糖、白内障发生率、糖化血红蛋白、血浆纤维蛋白原等。2．眼 底荧光血管造影(FFA)，观察大鼠眼底血管直径的改变以及荧光素渗漏情况。3．视网膜组织切片的HE 514 三、大会交流 染色，光镜下观察视网膜各层结构的变化。4．通过免疫组织化学法测定视网膜组织切片中nf-kb的表达。 5．视网膜消化铺片的PAS染色观察血管形态学上的改变。6．视网膜消化铺片的免疫荧光染色测定血管 6．0软件协同分析处理。 处理。眼底造影图片及血管铺片用AdobePhoteoshopcs5．0及ipp 二、结果 1．实验中模型组大鼠出现典型的三多一少症状，行动迟缓，毛色晦暗，部分大鼠呈进行性消瘦， 体重不增反降，并有两只因血糖过高，机体机能迅速衰竭而死亡。而空白组大鼠实验期间行动活跃， 饮食正常，毛色光滑，无多饮、多食、多尿现象，体重增长明显。对照药及络治组大鼠部分也出现三 多一少症状，但较模型组明显减轻，且体重增加量明显高于模型组，这一定程度上说明络治法可改善 高血糖状态下机体的代谢。 从各组血糖及糖化血红蛋白数据上分析，模型组、对照组及络治组三组 血糖及糖化血红蛋白均无显著性差异，这提示络治法的改善代谢作用并非通过降低血糖来实现。从血 浆纤维蛋白原数据分析，模型组血浆纤维蛋白原数值较空白组明显升高，提示高血糖可诱导体内纤维 蛋白原含量升高。但同时在高血糖的状态下，对照组及络治组血浆纤维蛋白含量反而降低，络治组尤 其明显