TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用.pdfVIP

所必需，camv35S启动子和llOS终止子几乎出现于所有转基因作物，很适合转基因食品的 筛查工作‘900】。因此，本研究通过PCR扩增calllV35S启动子和110S终止子来实现转基因食 品的筛查工作。本实验设计的引物特异性好，PCR产物特异性高【5】，可较准确地反应出市 售食品中是否含有转基因成分。 2002年，我国即已开始施行转基因食品的标识制度，要求进行标识的作物及制品有： 1、大豆种子、大豆、大豆粉、大豆油、豆粕；2、玉米种子、玉米、玉米油、玉米粉；3、 油菜种子、油菜籽、油菜籽油、油菜籽粕；4、棉花种子；5、番茄种子、鲜番茄、番茄酱。 要求标识的内容包括：转基因原料或种子标注为“转基因××”，转基因农产品的直接加工品 标注为“转基因xx力N-F品(制成品)”或者“加工原料为转基因XX”。但在实际生活中，相当 多的转基因食品并未进行任何标识。 本次调查的60个样品中，豆类制品53个，涉及30多个产品品牌，含有转基因成分食品 的比率为24．5％，阳性结果中外商、外资独资企业2家，国内企业8家；马铃薯类制品抽取 的7个样品均为薯条和薯片，涉及3个产品品牌，含有转基因成分食品的比率为28．6％，阳 性结果中外商、外资独资企业2家。进一步检查转基因成分阳性食品的转基因标识情况发 现，所有转基因食品均未进行标识。这一结果提示我们，尽管我国农业部2002年即颁布了 转基因食品标识制度，但这一制度仍未得到很好的执行。目前，我国尚未批准大豆和马铃 薯类转基因作物的环境释放和生产，市场上该类产品的原料应为进口入境，从原料到加工 产品的标识存在监管的盲点。因此，如何保护广大消费者的知情权和选择权，仍是食品监 管工作有待加强改进的方面。 基金项目：广东省医学科学技术研究基金(2004A069)，广东省“十一五”医学重点专科研究项目(粤 卫[2008】50号) TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用 黄俊明1李文立1胡帅尔1杨杏芬1陈海珍2谭剑斌1 (1广东省疾病预防控制中心，510300；2广东药学院公共卫生学院，510000) 【摘要】目的建立TaqMan探针法检测转基因大豆含量的实时定量PCR方法并应用于市 售转基因食品含量的检测。方法 豆检测的标准曲线，并对市场抽检的豆奶粉、素鸡、热狗肠、黄豆等12种豆类食品及制品 进行含量分析。结果在实验室建立了TaqMaIl探针实时荧光定量PcR检测转基因大豆含量 O．9994。12种市售大豆及制品中五香茶干、豆奶粉、素鸡、热狗肠、薄白叶的转基因成分 179 定量PCR法能够快速地进行转基因大豆含量的检测，并可应用于市售转基因食品的检测。 【关键词】TaqMan探针转基因大豆实时荧光定量PCR 20世纪80年代以来，生物技术以前所未有的速度迅猛发展。人们利用现代生物技术， 将某些生物的基因转移到其他物种中去，成功制造出转基因大豆、玉米等产品，并实现商 品化生产。与转基因食品迅猛发展的速度相比，其安全性评价工作则明显滞后。因此，加 强对转基因食品的定性、定量检测，已成为各国政府实现其对转基因食品进行有效监督、 监测和管理的重要技术支持平台。挪威规定转基因食品的限量标准为2％，欧盟为0．5％， 日本为5％【l】，我国农业部在“农业转基因生物标识管理办法’’(2004年修订版)中明确规 定市售转基因大豆、玉米、油菜、番茄及制品必需进行标识，但尚无“量”的标准。 目前转基因食品定量检测的主要方法为实时荧光定量PCR方法。常用的荧光标记方 Green 法有双链DNA内插式荧光染料(如SYBRI)以及杂交探针(如荧光探针和引物探 针)。尽管荧光染料技术成本低廉，实验设计简便，但检测具有非特异性。因此，为提高 检测结果的灵敏性、特异性、精确性，我们采用TaqMan探针技术，在本实验室建立转基 因大豆的荧光定量PCR检测方法，并应用于市场抽检产品的定量检测中，从而为我国转 基因食品的监督、监测和管理的提供一定的技术支持。 1．1材料 1．1．1样品 ReadyTM 转基因大_豆_RoundUpSoybean系列标准品，含量分别为O％、 肠、薄白叶、鲜黄豆、桶装拉面、五香茶干、黄豆酱、豆粉、饼干、熏干，为2007年5-6 月期间购自广州某大型