911荧光探针在911免疫增强机制探讨中的应用.pdfVIP

911荧光探针在911免疫增强机制探讨中的应用.pdf

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
911荧光探针在911免疫增强机耕探讨中的应用 苗本春,耿美玉·,李静,李福川,管华诗 (青岛海洋大学海洋药物与食品研究所,青岛266003) 摘要:本文对911.Frrc荧光探钎的可行性和适应性进行了验证,并应用此荧光探 针对十种肿瘤细胞、胸腺、脾脏淋巴细胞和巨噬细胞进行了荧光染色,采用流式细 胞仪及荧光显微镜对细胞的染色情况进行了评价.结果表明,911-FITC荧光探针 具有很好的可行性和适用性.且与淋巴细胞与巨噬细胞有特异性结合,而与肿瘤细 胞均无结合,推测911是通过增强机体的免疫力而起到抗肿瘤作用的. 关键词:911.FITC;荧光探针;荧光染色;特异性结合;抗肿瘤 天然产物中存在着广泛的生物活性多糖,多糖类具有增强免疫功能、抗氧化、 抗病毒、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性{lJ。目前的观 点多认为多糖的抗肿瘤活性主要是通过调节机体的免疫功能产生的,并且具有较强 的丝裂原样活性,属于具有抗肿瘤作用的生物反应调节剂(BRM).在抗肿瘤的辅 助治疗中显示出一定的应用前景口川。 荧光标记有着悠久的发展历史.随着生命科学的发展,荧光探针己被广泛应用 于组织学、细胞生物学、免疫学、药理学、临床医学等各个领域,对阐明生理机制· 推动生命科学的发展起到了重要的作用。 海洋硫酸多糖911是从海藻中提取分离.经化学修饰得到的海洋硫酸多糖类化 合物.平均分子量为6.0KD,前期研究表明9ll具有抗病毒、免疫增强等活性M, 能促进小鼠胸腺、脾脏细胞增殖及巨噬细胞吞噬中性红的能力,且能显著抑制小鼠 体内S-180肉瘤的生长,但体外对肿瘤细胞无明显的细胞毒作用.由此我们推测911 是通过增强机体的免疫力而发挥抗肿瘤作用的.为了深入探讨911抗肿瘤的分子机 制.我们对911进行了选择性荧光标记,并通过抗凝活性测定及体外活细胞毒性的 评价。对911.FITC荧光探针的适用性、可行性进行了探讨,且利用此荧光探针分 别与十种肿瘤细胞、胸腺淋巴细胞、脾脏淋巴细胞及巨噬细胞共同孵育,进行活细 胞荧光染色,以期进一步揭示911抗肿瘤的作用机制。 1材料与方法 1.1药品与试剂 O一25:瑞典Pharmacia 氰酸荧光素(FITC):均为美国Sigma公司产品;SephadexTM 析纯。 1.2验材料和仪器 昆明种小鼠(18±2曲:青岛市药物检验所提供:流式细胞仪:美国B—D公司: 1型血小板聚集及血凝测试仪:北京世 CO,培养箱:美国NUAIR公司;PABER Rainbow:BH-2型荧光显微镜: 帝科学仪器公司;酶联免疫测定仪:奥地利Spectra 日本Olympus公司。 1-3实验方法 1.3.1 911及911.FITC抗凝活性的测定 I型血小板聚集及血凝测试仪测定:测试杯中 参照95国家药典,利用PABER 1-t 加入预处理兔血浆100L,置于37__-0.5oC保温5分钟,然后各测试杯中依次加 itL 及1%CaCI,溶液20儿L,立即混匀后加入小磁珠,于血小板聚集及血凝测试仪测血凝 时间,每个浓度平均测三次。用六点法计算抗凝效价。 1.3.2体外细胞毒性的评价(MTT法)[51 无菌取小鼠胸腺、脾脏,剪碎,置200目的不锈钢网上轻轻碾磨,再通过密度 梯度离心获得淋巴细胞悬液(脾脏细胞用溶血素裂解红细胞).将细胞用含10%FCS 的1640培养基调成5X 组、911组(终浓度分别为1、10、100u g/mL)、91l·FITC组(终浓度分别为1、 10、100ug/mL).加药后将培养板置于37。C、5%C02培养箱孵育48小时后加入 L/孔),于 表示.用t检验分析组间均数的差异性。 1.

文档评论(0)

hnlhfdc + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档