2005-2006人源H3N2亚型猪流感中国分离株分子演化研究.pdfVIP

140 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 2005—2006人源H3N2亚型猪流感中国分离株 分子演化的研究 于海张强刘天强华荣虹童光志 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验窀哈尔滨150001) 摘要：本研究对黑龙江和广东省妁四抹N3N2亚型蓿流感分离株连行了垒基因组剥序，主要对HA和NA基因 序列有较高的同源性，HA基因核苷酸和氟基酸序列的同源性达99．6—99．9鬈，NA基因核苷酸和氨基酸序列同源性 皆属于人源H3N2亚型猪流感。 关键词：猪流感、HA基因、NA基因、序列分析、分子演化 influenza 猪流感(Swineinfluenza，S1)是由猪流感病毒(Swinevirus，SIV)引起的猪的一种急性、 传染性呼吸道疾病。虽然SIV引起的死亡率很低，病猪也可迅速恢复，但会导致猪增重受阻，肉料比 降低，生产性能下降，对养猪业造成极大的损失。另外，猪的种间屏障相对较低，是禽、猪、人流感 病毒共同的易感宿主，是流感病毒基因重组或重配的“混合器”和流感病毒新流行毒株产生的“孵育 器”…。因此，猪流感的影响不仅在于其显而易见的兽医传染病学的意义，更在于其深远的公共卫生 意义。 sI的发生和流行已有近百年的历史，欧、美、亚、非、澳湘等世界各地均有该病的发生和撤道。 2006年，我们开展了猪流感分子流行病学和血清学的初步研究，现将工作中的人源H3N2亚型猪流感 中国分离株分子演化的研究报告如下。 1材料和方法 1．1毒株 医研究所鉴定。毒株名称及缩写分别为： A／Swine／Heilongjiang／01／2005(H3N2)(缩写为Sw／I-[LJ／0I／05)； A／Swine／Guangdong／164／2006(H3N2)(缩写为Sw／GD／164／06)； A／Swine／Guangdong／165／2006(H3N2)(缩写为Sw／GD／165／06)： A／Swine／Guangdong／166／2006(H3N2)(缩写为Sw／GD／166／06)； 1．2试剂 QiagenRNAeasyauRNA提取试剂盒购自Qiagen公司、LA Taq聚合酶、PMDl8．T载体和限制 基金项目：国家科技攻关项目(2004BA519A55) 作者简介：于海(1980一)，男，山东牟平人，在读博士，研究方向为猪流感的分子流行病学及其诊断方法。 通讯作者：童光志。电话：0451Email：gztong@public．hr．h1．c11 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 141 。 性内切酶购自大连宝生物公司、Biospin胶回收试剂盒购自博日生物技术有限公司。 1．3 SPF鸡胚 由哈尔滨兽医研究所SPF中心提供。 1。4病毒增殖 采集病料，无菌研磨，收集浸出物，或者将鼻拭子浸泡于生理盐水中，2000—3000印m离心lOmm， 死亡或未死亡鸡胚尿囊腔液”l。 1．5 RT—PCR 用Qiagen RNA提取试剂盒提取病毒基因组RNA．反转录合成cDNA。然后以合成的 RNAeasyTM eDNA为模板，用针对H3N2亚型猪流感病毒基因组的12对引物，进行PCR扩增。 1．6 PCR产物回收、克隆及测序 后将阳性菌液送上海英骏生物技术有限公司测序。 1．7序列拼接及分析 氨基酸序列的同源百分率、绘制进化发育树。 ， 2结果 2．1 HA基因序列分析 三株病毒HA基因同源性较高，其核苷酸和氨基酸同源性分别为99．6—99．9％；这三株病毒与参考毒株 SW／HLJ／74100同源性最高，其核苷酸和氨基酸同源